人脐带植块培养清洗换液的问题

18943340581

回复 willow0711 的帖子5 f* [" M  {7 N: t- i2 x

% @5 E$ i2 V3 B1. 得到华通氏胶后，如果没有残留的血液就不需要另外冲洗了，但是如果有血液一定要将血液清洗干净，不然血细胞会影响间充质干细胞的生长。; `9 t& C/ Z& b  j7 P% I7 k
2. 我们实验室目前是 铺完组织块24h后 补4ml/皿，我们用的是100mm的皿。之后每隔3天半量换液一次，一般7天就能见细胞，16天左右就可以收集细胞了。

xuyang0317

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/ d' Z5 \$ Z2 e; \* w& q- _7 i' V8 Z
1.将脐带去血后用pbs洗2次后尽量去水后再剪碎，洗涤后水分较大，不利于组织块贴壁；0 a' X6 @2 G* z. j
2.细胞能不能爬出来，我个人觉得最大原因是个人体质的原因（分离了2年的脐带经验），其次就是和您使用的培养液有关系，跟你有没有洗涤没有多少关系；
1 t& }' d. B. Z( @3.组织块贴壁放入培养箱3-5小时后，直接加入含10%的FBS和EGF培养液，放置3天后观察有没有污染，没污染的话6天左右就可以看见少量细胞沿组织块周围爬出，这时候可去除组织块，全量更换新鲜完全培养液，再放置3天左右，首次传代即可。

zhangshich

有时候细胞就在组织块的底下，组织块脱落有部分细胞贴在板底。其实换液都没有一定，关键是不要让组织块漂浮起来。

willow0711

单个核细胞 发表于 2013-12-18 11:50
* {+ e- P/ o! Q4 }; M, o; k回复 willow0711 的帖子' s% J6 Q% `9 M7 |& ]$ M3 r

% h9 i, v; [% k" \$ L8 Z1.不需要特意洗涤，洗涤后水分较大，反而不利于组织块贴壁；

  }+ r1 g2 l+ O/ R0 i& q9-10天中间都不换液吗

willow0711

回复 单个核细胞 的帖子5 e0 [, @0 Y- R

& ~( v* s/ M' i( y; M: }哦

单个核细胞

' M, z  z/ I" \' B/ Q
7 @2 u" d; P4 U( q
回复 willow0711 的帖子% z6 ^5 R1 a* _9 P- S
! q9 N3 `4 n, {
1.不需要特意洗涤，洗涤后水分较大，反而不利于组织块贴壁；4 R+ g* X5 z1 `
2.细胞能不能爬出来，个人认为跟你有没有洗涤没有多少关系；3 S' b( t' [1 Y. F" l, M0 S. W  y
3.组织块贴壁3-5小时后，可直接加入完全培养液，放置9-10天后观察，可见少量细胞沿组织块周围爬出，这时候可去除组织块，全量更换新鲜完全培养液，再放置3天左右，首次传代即可。
7 e6 U0 K$ ?, m- G3 v4 \+ U# w# F) O6 u4 k/ d8 N! |' u$ M
附图如下（点击图片可放大）：
" l5 Q& a! q' P
* A1 B) n" S5 i6 \! Y) e  @. d

willow0711

mtdj1314 发表于 2013-12-18 10:33
% v. k7 j% Q$ p- e9 ?* {以我的经验，
9 |4 j7 O( g+ L# t* C0 Y; y3 h  F+ M( o1、剥离脐带时候，得到的华通氏胶不需要再清洗
+ w* ^- v4 i  @3 w, j& S6 _2、在3-4天补充液体，7天半量换液比较有利于 ...

( k2 q. I1 T' l# [
那你的方法，一般什么时候细胞爬出？多久传代呢

willow0711

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, u0 X4 Q6 \9 N/ w( w# c0 t) s/ R- F+ T" N& x7 ?
哦，谢谢

willow0711

回复 zhusealin 的帖子2 S' o9 G5 R7 e7 B% Y

& P8 Z9 c/ D+ T" B/ _7 R9 B% E/ b5 H0 u+ f哦，谢谢

mtdj1314

以我的经验，
2 @$ O( k/ z* e8 A5 U: w1、剥离脐带时候，得到的华通氏胶不需要再清洗0 H! u9 E8 u) l9 N1 Y3 v4 N
2、在3-4天补充液体，7天半量换液比较有利于细胞爬出。