多能干细胞的扩增

穿裙子的猫

之前进行了一次多能干细胞的扩增。步骤：96孔板预铺被饲养层细胞，
( ^/ T' @, n  I( N: Y0 z) c& U5 V5 _* ^2－3天后挑取干细胞克隆，机械吹打，接种于饲养层上，加干细胞完全培
2 x8 T1 g3 l' p, V5 P. g# {! F养基100ul，干细胞克隆成活的不太好，请问各位老师们可有扩增的方法以及技巧呢？万分感谢呢！

ciweiyuan

1.建议不要用96孔板，孔太小，mef容易铺不均匀，改用12孔* i& M( q8 m0 }: k3 D6 G! `$ Y. [
2.挑取得克隆不要吹打的太小，否则不容易长起来0 U1 d# U: s6 g7 p
3.不知道你的多能干细胞是人的还是小鼠的，小鼠的一般3天就能长起来，如果是人的，它的生长相对慢一些，建议你多等两天看看。% _2 T  o5 C; c, L& i
4.如果还是不行，你可以加rock通路的抑制剂Y27632来抑制细胞的凋亡，提高细胞的存活率。) G: M2 i  L7 O4 b6 B+ Y
5。96孔板一个孔加100培养基是不是太多了呢，我一般是加50，加的太多，细胞容易缺氧对存活率也有影响的。
' _- L% c, P) E# u8 N5 v6机械吹打时请稍微轻柔一些。! l; o( u( u& Z4 z% e) |: Z* M: g
希望对你有帮助。

穿裙子的猫

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% m3 u3 f/ Q) O* _* x
/ S6 }- E2 t- z5 @8 E& z. U谢谢美女的答复，昨天又重铺了一个12孔板，我转染的细胞是人原代细胞，大概5天左右开始出现克隆。转染后48小时看了下荧光，只能看见零星的几个细胞发荧光，转染率基本是百分之几，我设的MOI值是15：1，是不是相对太少了？! }; ~! f+ Q4 y
另外，你看我的细胞图片，目前克隆周围出现分化和未分化的区分，看ES图片，别人的都是小颗粒样细胞啊！不知道是不是细胞来源不同造成的？

穿裙子的猫

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- e! E/ U! y( u" J% }
不好意思，图片没有传{:3_57:}上去

细胞海洋

回复 穿裙子的猫 的帖子% }% G  E- D3 G7 \2 g

. U6 ~8 d/ i* _/ o5 v" o( n/ k单个图片不要大于1000kb 可以裁剪或者截图

569981454

克隆团也可以用酶轻轻消化一下培养，96孔板空间太小了。

穿裙子的猫

回复 ciweiyuan 的帖子7 g; h1 I7 \. K$ }5 v' r  P6 j
; P6 M( Z5 P7 b
今天看传代的干细胞，果然是吹打的不宜太小，有一个孔的细胞现在已经开始成克隆样生长了，而吹打的太小的克隆，现在好像有点。。。都像单细胞了，估计长起来会很慢！1 ]; n0 \  K  `! x& l0 J3 l
谢谢你的经验!

穿裙子的猫

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* |1 ?: N' X. Q3 F+ B: ^9 B- n' w+ g) _6 @9 r! w
好的，谢谢！:lol

穿裙子的猫

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/ |5 o( H% a! e2 T9 U1 e5 G1 l  q
# P0 W0 b3 d$ b. @$ |( z600多就传不上去了，怎么回事？版主？:L

细胞海洋

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1 O# g  v* p: k
再试一次 应该没有问题