求助好像ES培养液对铺好的MEF有影响

葱葱

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1 G. j6 a- `: E6 v* ~$ B( y* P9 Q! {7 w大家好，我在做小鼠胚胎干细胞培养实验，我想问一下，把培养好的细胞团移植到新的饲养层前，新的饲养层是否要提前换成ES培养液？我试着换了，好像ES培养液对铺好的MEF有影响，对细胞团也有影响，只是简单地适应问题，还是我换成ES培养液的时间不对？（注：囊胚发育至细胞团期间均在饲养层上，但培养液是普通的培养液，MEF长的很可以，囊胚发育的也不错，细胞团移到新的为ES培养基的饲养层上，MEF有变化，细胞团有很多死亡。）

watchen198891

我们实验室一般MEF上接ES饲养前都会用ES培养液对MEF进行孵育，大概时间是两个小时到三个小时，ES培养液对MEF是有一定影响的，我还试过直接用ES培养液来养成纤维细胞，一样能够使其快速增殖，但是这个结果没有重复，仅仅是个人说法，参考而已。我在养ES得时候没有发现ES培养液对MEF影响有多大，如果你的MEF没有处理好的话，MEF会在ES培养液中迅速增殖的。

葱葱

非常感谢，我还想问一下您的饲养层密度是多少?我用的是每毫升2乘10的5次方，这种密度下，囊胚贴壁长起来了，但看着mef很密。另外，我想之所以ES培养液造成MEF部分死亡，估计是ES培养液我配的有问题。。。

细胞-77

你是自己从囊胚中建MES细胞系吗？

细胞海洋

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细胞海洋

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2 G8 c4 Z# ]7 h! |: c" e看3楼

watchen198891

回复 葱葱 的帖子+ S7 W3 m5 L+ B- ?
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我养得是猴子的ES，我用的密度是3乘10的5次方。小鼠的我没有饲养过，所以不清楚饲养层的密度。按照常理来说ES培养基孵育MEF的时候是不会造成MEF死亡的，我想你应该从ES培养基还有就是你饲养层的制备去找原因。

葱葱

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$ {1 E3 {' Q3 x- g# w+ e非常谢谢。。。

葱葱

回复 细胞-77 的帖子* w" y/ \1 D" a0 j
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是的。。我最近在养小鼠囊胚，经历了鸟巢等。已经长出内细胞团了，内细胞团周围应该是滋胚层细胞吧，感觉内细胞像是一个孤岛，饲养层被挤到周围了。你遇到过这种情况吗？4 m5 X, k0 K1 }. k

葱葱

回复 watchen198891 的帖子  M# Z8 m1 j; D" E; {/ t. l) H  q
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请问，你的ES里加2-巯基乙醇了吗？我在想是不是我的配方有问题？你配ES培养液时，100ml加多少LIF，加多少2-巯基乙醇？非常感谢。。。