ips传代

穿裙子的猫

现在我正在进行IPS的第一代传代，用5ml枪头将克隆挑出，
5 R! H2 `  X. T' A放入1.5ml的EP管内进行机械吹打，吹打2遍之后，肉眼仍" G. H8 {) }4 J3 C( d
可见未吹散的细胞团，这么大的克隆怎么能够吹打成小块呢？
" E1 V+ P1 J/ r: x6 c2 \/ v* @8 t* p小块更容易贴附，是吧！& G4 d! h! @7 [2 O- T
:loveliness:各位高手们，你们怎么做的？

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回复 yuri.2004 的帖子1 y' P; X0 {  c! r

# x* U& ?5 Y% L" s+ ^- R. }5 [谢谢，第一代的话，我没有采用胰蛋白酶酶消化，
- V* y2 v# Z! H' \只是挑取，剩下的细胞团还可以继续生长。- X/ q8 P/ A- X, x7 H2 ^
! Z0 t' O6 ^0 F0 s6 q3 b6 J7 k+ i
我观察了下，贴壁的细胞基本是贴在滋养层细胞上的，所以, y3 O$ f/ m1 |& ]" o+ d5 O; R
想请问，消化的干细胞什么时候可以不用再铺被滋养层细胞呢？2 e7 Y& R. j5 x4 q9 ^1 a" H

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回复 yuri.2004 的帖子* r7 O, J, z5 x/ ]
* d& R- w/ n3 p: t/ i
传代后的细胞因为吹打太散了，现在是这样的，边界不清，平面生长，胞浆较大。跟你们的一样不？这像不像分化了的？

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回复 孙帅帅 的帖子9 O  d0 |9 X9 q$ J0 v& U

- F# c0 {8 h, l) n' p1 [4 x; n把肾小球去掉就对了，是表皮里的黑素细胞，
6 Y% ?. O0 V; J4 w( d8 e0 N我现在用的胰酶都是**%胰酶/EDTA,用EDTA消化有什么不一样的吗？:D

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回复 yuri.2004 的帖子3 I+ f$ j2 r( m; f, Y8 j7 {
* u4 ~9 v: j, `4 w  {
我这个是挑取的克隆，吹打的太厉害了，现在贴壁4天了，
6 I9 ?. K4 n! k3 r/ @1 N之前形成克隆的时候，边界就是这样的细胞，中间是克隆
# h$ U1 Z0 U6 w: c! y样的，我这不会是一边克隆，一边分化把？请指教啊！9 _+ R  v2 o4 M8 x& N: k
2 Z) }5 ^  h/ `: D/ M8 ?
补充内容 (2013-12-27 08:31):
9 V  X" V  A! a$ K5 n/ n另外，那些克隆现在出现了中间变黑的现象，难道真像你所说的分化?

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回复 yuhaoze 的帖子: Y" k, E' P/ n$ ~; n. J3 F, E
+ U* d$ F& m, _0 z7 c' a2 E
打击我了！会不会细胞来源不一样，生长形态就不一样，
1 I" W3 }. j' q9 C' J4 Q这种细胞我之前做过碱性磷酸酶染色，阳性。

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回复 yuri.2004 的帖子
  u1 k! [$ f; `. d6 `8 _  |" [: d# V/ ^0 I& H/ i
那你是用哪个浓度的胰酶消化呢？一般是0.05%还是0.25%？