ips传代

穿裙子的猫

现在我正在进行IPS的第一代传代，用5ml枪头将克隆挑出，
) i: {* q3 ~5 H放入1.5ml的EP管内进行机械吹打，吹打2遍之后，肉眼仍
' R. Q9 P0 E% n" V7 I可见未吹散的细胞团，这么大的克隆怎么能够吹打成小块呢？* {# x4 |. [  T9 F: N
小块更容易贴附，是吧！) e0 j" M/ w: f) t& W
:loveliness:各位高手们，你们怎么做的？

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回复 yuri.2004 的帖子
2 |! i2 q# z- o% o9 l& S, I: G* w5 ]8 |, y5 l
谢谢，第一代的话，我没有采用胰蛋白酶酶消化，4 T! ^+ ?7 \, ^9 P+ c
只是挑取，剩下的细胞团还可以继续生长。
. b% V6 S* Q5 [0 Q0 D( j3 e
2 f5 l: I2 c; d. T& B我观察了下，贴壁的细胞基本是贴在滋养层细胞上的，所以
/ M$ [* K0 O  X6 I( Q5 m! w想请问，消化的干细胞什么时候可以不用再铺被滋养层细胞呢？
3 w  Y, }, Z+ [- U

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回复 yuri.2004 的帖子, e7 f% X* P4 \: g) P

+ T/ {9 E; ~" b* j$ W: ?  n+ X传代后的细胞因为吹打太散了，现在是这样的，边界不清，平面生长，胞浆较大。跟你们的一样不？这像不像分化了的？

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回复 孙帅帅 的帖子
3 T/ d0 B  t2 u' E1 P" O) Y' k) p4 R$ X  M- H! d
把肾小球去掉就对了，是表皮里的黑素细胞，
3 ~4 T  N) e+ U' G6 @% p0 X* s! W我现在用的胰酶都是**%胰酶/EDTA,用EDTA消化有什么不一样的吗？:D

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回复 yuri.2004 的帖子7 k5 {% `% k5 x) E& `* b% ~7 _& m
- F9 V3 ?* F; z# x; i) d
我这个是挑取的克隆，吹打的太厉害了，现在贴壁4天了，
+ i& k+ M* O3 P5 k: v  r之前形成克隆的时候，边界就是这样的细胞，中间是克隆
" V: f: q; [8 y5 `8 `; J样的，我这不会是一边克隆，一边分化把？请指教啊！
& I; e! s: A4 R$ B/ }1 I& v/ Y! z2 l
6 y" m. j: b. r: P1 e6 w+ Y& n补充内容 (2013-12-27 08:31):
9 ]& \  G" @" s% {% x另外，那些克隆现在出现了中间变黑的现象，难道真像你所说的分化?

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回复 yuhaoze 的帖子
/ B0 z0 P5 \- S. x& c/ w' n6 p2 x3 L8 G# Q+ G" Q6 U, F/ H/ ?! {
打击我了！会不会细胞来源不一样，生长形态就不一样，' D* n) E2 z+ ~: M% D
这种细胞我之前做过碱性磷酸酶染色，阳性。

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回复 yuri.2004 的帖子
  ~3 r3 \; O6 J4 A. a7 e- F
: D" H! r9 P  ?, t% U( |4 B+ G那你是用哪个浓度的胰酶消化呢？一般是0.05%还是0.25%？