ips传代

穿裙子的猫

现在我正在进行IPS的第一代传代，用5ml枪头将克隆挑出，9 d5 m3 L" G& \- O5 `( L
放入1.5ml的EP管内进行机械吹打，吹打2遍之后，肉眼仍2 p/ n1 A' ?+ ?9 e- r2 Z7 |
可见未吹散的细胞团，这么大的克隆怎么能够吹打成小块呢？
, h; a" M7 k3 P  v5 ^! V' \5 _: D小块更容易贴附，是吧！4 [4 O$ \# Z! C/ S/ q6 r
:loveliness:各位高手们，你们怎么做的？

yuri.2004

你可以先用胰蛋白酶进行一下消化。这个过程要注意消化的温度和时间，注意在倒置显微镜下观察，消化适度后去除消化液，加点培养基，用枪轻轻吹开细胞。然后要经过离心去上清，再加培养基重悬后，分装培养就行了。。 最好有多孔板，方便操作和观察。

穿裙子的猫

回复 yuri.2004 的帖子  {" }  y6 P$ C+ w6 O$ J3 c

8 i6 F" E% |: d谢谢，第一代的话，我没有采用胰蛋白酶酶消化，
9 E2 r: \5 z& ]- N7 ?只是挑取，剩下的细胞团还可以继续生长。
- S6 c9 n$ P) z9 ]4 D! u
" c6 x% l# `9 A2 h7 C, E3 P* P我观察了下，贴壁的细胞基本是贴在滋养层细胞上的，所以
+ y: n; r$ r2 H1 U8 y2 c$ s想请问，消化的干细胞什么时候可以不用再铺被滋养层细胞呢？
; a- C: D5 }9 p2 M3 o6 E3 Q4 [! j# ~

yuri.2004

回复 穿裙子的猫 的帖子) k' C  ]$ d5 Z
4 d0 s6 w! N* S$ h. v2 b( d4 G
    按照你的意愿，你也可以把挑出来的细胞加到一个板里进行消化嘛~这样方便一点。& ?9 P' R/ K1 V; d% I* q
    滋养层细胞都不是必须的~有一种培养是无饲养层的，直接可以养IPS的~我们这边就是用无饲养层培养的。我看过资料，IPS和滋养细胞对酶的消化程度不同，应该是IPS先消化下来吧，你可以核对一下这个。只要把两种细胞分开了 ，直接用不加饲养层的方法，问题应该不大。不过细胞应该会有个适应过程。

穿裙子的猫

回复 yuri.2004 的帖子
$ f$ o$ k" V7 o2 p6 X2 l5 z( h" S/ n
传代后的细胞因为吹打太散了，现在是这样的，边界不清，平面生长，胞浆较大。跟你们的一样不？这像不像分化了的？

穿裙子的猫

孙帅帅

你是转染的肾小球表皮细胞吧，还是不要消化，那样细胞会很杂。以后传代用EDTA消化，不要用胰酶。

yuri.2004

回复 穿裙子的猫 的帖子' Z1 P1 |/ S: N- T7 D- B

, E  G4 |: Y9 @& H1 G你这个是正在诱导IPS吗？看着更像是诱导IPS过程中的图。还有部分饲养层细胞能看到。中间那些细胞团的确是IPS的样子，现在还看不出来是否有分化的。等细胞团足够大了，如果克隆团中间部分有颜色变深发黑，或者很明显的细胞形态变化之类的，那种是出现分化了呢。

yuhaoze

这些细胞不是iPS吧，不像

穿裙子的猫

回复 孙帅帅 的帖子
0 Z. P. R/ ]1 {( l4 b- r! W2 q6 I+ d, Y7 l1 W
把肾小球去掉就对了，是表皮里的黑素细胞，
) V7 ]& ^  S; [. ]! t9 C" [我现在用的胰酶都是**%胰酶/EDTA,用EDTA消化有什么不一样的吗？:D