ips传代

穿裙子的猫

现在我正在进行IPS的第一代传代，用5ml枪头将克隆挑出，  [8 w- u! I# T; ~& `
放入1.5ml的EP管内进行机械吹打，吹打2遍之后，肉眼仍
6 N. K" ]' {4 t' O+ m- q" D可见未吹散的细胞团，这么大的克隆怎么能够吹打成小块呢？" n5 e. q. x6 D
小块更容易贴附，是吧！
; N! r2 ]5 I0 O) c7 P+ n:loveliness:各位高手们，你们怎么做的？

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回复 yuri.2004 的帖子0 Q" {& U8 w1 j: v5 ~" B

" ?+ F, `8 P" K- {; [  v谢谢，第一代的话，我没有采用胰蛋白酶酶消化，7 V+ f! [" y4 z& Y1 c- Q2 N! i
只是挑取，剩下的细胞团还可以继续生长。; x# L! g& v3 W$ t0 |8 T. k

0 J" A7 [! z  u* z  i我观察了下，贴壁的细胞基本是贴在滋养层细胞上的，所以
4 q/ [: }& a! N; W( O% Y想请问，消化的干细胞什么时候可以不用再铺被滋养层细胞呢？/ o3 h  Y. ^8 Q

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回复 yuri.2004 的帖子9 E# L6 d% f8 L- _4 u; z2 N, p4 W

1 E3 l8 w/ N2 @9 Y传代后的细胞因为吹打太散了，现在是这样的，边界不清，平面生长，胞浆较大。跟你们的一样不？这像不像分化了的？

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回复 孙帅帅 的帖子3 G9 a7 @- Y! \  ^1 K6 O. `% X3 |8 I
" z7 j7 F# w8 f: @1 k
把肾小球去掉就对了，是表皮里的黑素细胞，
: F" C% Z& ?. {: j# e$ {) q. e我现在用的胰酶都是**%胰酶/EDTA,用EDTA消化有什么不一样的吗？:D

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回复 yuri.2004 的帖子
9 l! F6 y5 i7 h' D! G
  O& n7 d0 Q. h. a) d. ]我这个是挑取的克隆，吹打的太厉害了，现在贴壁4天了，
7 i1 O8 K! ~* X7 g  `之前形成克隆的时候，边界就是这样的细胞，中间是克隆
# d0 X2 Z/ O6 ]. W+ m样的，我这不会是一边克隆，一边分化把？请指教啊！
8 @" F" Q0 ]# q, Q' X( ^$ E" U0 S2 Q" T* L0 M% ~
补充内容 (2013-12-27 08:31):
' m4 B" {; z2 L! q) x, \另外，那些克隆现在出现了中间变黑的现象，难道真像你所说的分化?

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回复 yuhaoze 的帖子
2 b2 W2 d. U0 X7 T5 e
" @- }' G* I) z5 L8 l  @打击我了！会不会细胞来源不一样，生长形态就不一样，
: F6 U* e! @( g1 ^这种细胞我之前做过碱性磷酸酶染色，阳性。

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回复 yuri.2004 的帖子' K$ A. }+ q* A$ J# K, V
$ P0 u; M7 X, o& ?
那你是用哪个浓度的胰酶消化呢？一般是0.05%还是0.25%？