CIK冻存液配制？在培养基是先加“血清”还是先加“DMSO”

aochongyu

在培养基是先加“血清”还是先加“DMSO”，DMSO的加入速度是不是要很慢？希望得到大虾指点，谢谢

孙帅帅

先加血清，然后再慢慢滴加DMSO，并且在滴加过程中要不停地晃动。因为DMSO加入培养基的过程中会产热，影响冻存液的温度，而DMSO在4℃时候对细胞损害最小，所以DMSO要慢慢滴入培养基，配好的冻存液要在4℃冰箱中预冷一段时间才能用。

星空雾雨

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, N# F: `. T( N; c/ G+ B  |你说的这不是CIK的复苏吧   悬浮的怎么看出50%  80%

18605313076

一般用FBSMSO=9:1或者培养基：FBS：DMSO=7:2:1。先加血清，然后一滴一滴加入DMSO，一边加一边晃动离心管，防止产生絮凝。

sewing

回复 sewing 的帖子& i/ Y# ~1 m! W) d( V  m5 I

, g2 z3 K6 e1 d“冻存管解冻后将细胞悬液洗到离心管中”这句话打错字了，应该是“冻存管解冻后将细胞悬液吸到离心管中”，不好意思哦~

sewing

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1mL冻存管里面的细胞密度为0.5-1×107。冻存管解冻后将细胞悬液洗到离心管中，加入适量培养基离心洗涤，以去除DMSO，根据离心后细胞沉淀的量加入适量的培养基，没有说细胞密度一定要在哪个范围。一般我们培养细胞的话培养瓶里面的细胞密度50-80%是恰当的，密度太低了，细胞和细胞之间的联系会减弱，不利于生长，密度太高了，细胞和细胞之间会出现接触抑制，同样不利于生长。

星空雾雨

回复 sewing 的帖子* p6 R% F4 L8 P: S
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谢谢！冻存时每管多少细胞，然后4或5管复苏后加多少培养液  需要保证细胞浓度在多少范围？

sewing

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我们一般4或5管冻存管复苏后放一个培养瓶培养，复苏后加在1640培养液离心就好~

星空雾雨

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复苏的话 多少细胞一瓶 浓度多少，还有复苏后直接加在1640培养液中离心吗？

xinquan15

细胞冻存液成分包括培养基，血清，血清：DMSO最终比例为血清：20％，DMSO7-8％，先配制成冻存液1和冻存液2两种液体，1液成分为培养基，2液成分比例为培养基：血清：DMSO=45：40：15;配制时在培养基中加入血清，然后缓慢加入预先低温处理的DMSO,边加边摇，冻存时，先用1液重悬细胞，再逐滴加2液，边加边摇。