cck8

linlin532775462

请教各位师兄，师姐，具体怎么用cck8来检测细胞增殖呢，最后绘制生长曲线呢，每个孔都有加cck-8吗，空白对照怎么设呢，谢谢各位前辈了
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如醉如痴的

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6 H  }2 k; k3 s, O9 ]7 `' ^您好，我想问一下，那个特定药物刺激，是什么药物呢

18605313076

这个和MTT检测原理差不多，只不过比MTT更为方便，不用加DMSO溶解。而且也适合悬浮细胞。空白对照组：就是不加细胞，只含培养基的组。同时你还要设置阴性对照组：只加细胞不加药物的组。具体的说明书网上都有，你可以参考看看。

johnkye

6 s% c$ R! S& b- A6 Q' f) m( X+ r
1. 在96孔板中接种细胞悬液(100 ul /孔)，通常细胞增殖实验每孔约2000个细胞，细胞毒性实验每孔
3 d5 f. [# q! y" C! Q! V/ i约5000个细胞，具体每孔所用的细胞的数目，需根据细胞的大小，细胞增殖速度的快慢等因素决定)。0 A+ Z6 L7 ~) B" x( Y
2. 按照实验需要，进行培养并给予0-10ul特定的药物刺激，处理一段适当的时间(例如: 6,12, 24或48; Y4 n4 r( f4 L  p
小时)。
  j3 }4 }" S6 Z! r8 Z* p' u1 E3. 每孔加入10ul CCK-8溶液。如果起始的培养体积为200ul，则需加入20ul CCK-8溶液，以此类推。可
7 A  ]& x8 l) W. M* O+ q以用加相应量细胞培养基和CCK-8但不加细胞的孔作为空白对照，若担心所使用的药物会干扰检5 b( ^8 {0 E3 y) c
测，需设置加相应量细胞培养液、药物和CCK-8溶液但不加细胞的孔作为空白对照。4 U1 m5 o0 U- d6 M0 }% a
4. 在细胞培养箱内继续孵育1-4小时，具体时间可以通过预实验确定。预实验时可以在0.5、1、2和4小) @. H2 m- a7 q! P. ^
时后分别用酶标仪检测，然后选取吸光度范围比较适宜的一个时间点用于后续实验。
& U2 @7 [0 h- E5 C: H5. 用酶标仪测定在450 nm处的吸光值，若无450nm滤光片，可以使用420-480nm的滤光片。如果样品2 p  _; U- X" ~" e& J+ c6 g, `
为高浑浊度的细胞悬液，可以使用大于600nm的波长，例如650nm，作为参考波长进行双波长测定。
; E) H* M/ B3 d9 V) h6. 如果需要暂时不测定O.D值，可以向每孔中加入10ul 0.1M HCl溶液或者1% w/v的SDS溶液，避光保
! v( G, o- C- ?3 _% W& a# o存在室温，24小时内吸光度不会发生变化。" `- p: A( ?6 z) R+ ~. a6 F3 @