cck8

linlin532775462

请教各位师兄，师姐，具体怎么用cck8来检测细胞增殖呢，最后绘制生长曲线呢，每个孔都有加cck-8吗，空白对照怎么设呢，谢谢各位前辈了
( M) ~. M! E2 {: p4 S0 K- j) X$ g，

johnkye

4 g; l8 M& g9 @& p% L

/ ^9 v8 F3 X0 C8 Z& J; P( d+ k1. 在96孔板中接种细胞悬液(100 ul /孔)，通常细胞增殖实验每孔约2000个细胞，细胞毒性实验每孔
4 ?8 m/ b( H1 N2 n! r2 j& \. I约5000个细胞，具体每孔所用的细胞的数目，需根据细胞的大小，细胞增殖速度的快慢等因素决定)。
* [2 c2 N6 ^4 x2 c$ @2. 按照实验需要，进行培养并给予0-10ul特定的药物刺激，处理一段适当的时间(例如: 6,12, 24或48( E: l0 G( i: [% ^5 }  o
小时)。
, k- l: x- x; `7 X& o. M. Q3. 每孔加入10ul CCK-8溶液。如果起始的培养体积为200ul，则需加入20ul CCK-8溶液，以此类推。可
% X- N9 _5 `/ y% a以用加相应量细胞培养基和CCK-8但不加细胞的孔作为空白对照，若担心所使用的药物会干扰检5 {9 U# ^. t, B% n- l
测，需设置加相应量细胞培养液、药物和CCK-8溶液但不加细胞的孔作为空白对照。1 n4 H' e2 t7 H4 j
4. 在细胞培养箱内继续孵育1-4小时，具体时间可以通过预实验确定。预实验时可以在0.5、1、2和4小
# o& d! b1 y$ Z+ l时后分别用酶标仪检测，然后选取吸光度范围比较适宜的一个时间点用于后续实验。( `) g) [& ?1 A5 U
5. 用酶标仪测定在450 nm处的吸光值，若无450nm滤光片，可以使用420-480nm的滤光片。如果样品& L  x4 Z- [/ o/ E# R/ G
为高浑浊度的细胞悬液，可以使用大于600nm的波长，例如650nm，作为参考波长进行双波长测定。3 y# i* `; U7 Q( F& v9 e+ T$ f
6. 如果需要暂时不测定O.D值，可以向每孔中加入10ul 0.1M HCl溶液或者1% w/v的SDS溶液，避光保( I3 c' }( s; m0 ^* U
存在室温，24小时内吸光度不会发生变化。! T' o; w7 k  c" d- ~

18605313076

这个和MTT检测原理差不多，只不过比MTT更为方便，不用加DMSO溶解。而且也适合悬浮细胞。空白对照组：就是不加细胞，只含培养基的组。同时你还要设置阴性对照组：只加细胞不加药物的组。具体的说明书网上都有，你可以参考看看。

如醉如痴的

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0 r4 {4 M: k+ P. P/ G8 o% n9 C! e您好，我想问一下，那个特定药物刺激，是什么药物呢