cck8

linlin532775462

请教各位师兄，师姐，具体怎么用cck8来检测细胞增殖呢，最后绘制生长曲线呢，每个孔都有加cck-8吗，空白对照怎么设呢，谢谢各位前辈了
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johnkye

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1. 在96孔板中接种细胞悬液(100 ul /孔)，通常细胞增殖实验每孔约2000个细胞，细胞毒性实验每孔
: F$ i8 }. }- x$ E/ b+ G% B/ y( G0 Z约5000个细胞，具体每孔所用的细胞的数目，需根据细胞的大小，细胞增殖速度的快慢等因素决定)。5 R3 F7 m2 c. H6 M' _
2. 按照实验需要，进行培养并给予0-10ul特定的药物刺激，处理一段适当的时间(例如: 6,12, 24或48
7 J% J' s# G: A5 v小时)。% n4 u) I& c2 D
3. 每孔加入10ul CCK-8溶液。如果起始的培养体积为200ul，则需加入20ul CCK-8溶液，以此类推。可. h% ]7 G- |  O. U
以用加相应量细胞培养基和CCK-8但不加细胞的孔作为空白对照，若担心所使用的药物会干扰检
8 ?6 `0 T: x% B测，需设置加相应量细胞培养液、药物和CCK-8溶液但不加细胞的孔作为空白对照。
+ {/ b  L& b0 w' n- k% b( ~% U4. 在细胞培养箱内继续孵育1-4小时，具体时间可以通过预实验确定。预实验时可以在0.5、1、2和4小
" h, \! i6 u# T: `& U4 P时后分别用酶标仪检测，然后选取吸光度范围比较适宜的一个时间点用于后续实验。
8 H  Q! m  D6 I. t+ q; D- J  j1 |5. 用酶标仪测定在450 nm处的吸光值，若无450nm滤光片，可以使用420-480nm的滤光片。如果样品( v0 A5 O$ q5 p7 K7 W
为高浑浊度的细胞悬液，可以使用大于600nm的波长，例如650nm，作为参考波长进行双波长测定。, \0 s7 {( c# |, _3 U
6. 如果需要暂时不测定O.D值，可以向每孔中加入10ul 0.1M HCl溶液或者1% w/v的SDS溶液，避光保- S! X# ~, }- x3 r  ?- v7 f
存在室温，24小时内吸光度不会发生变化。
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18605313076

这个和MTT检测原理差不多，只不过比MTT更为方便，不用加DMSO溶解。而且也适合悬浮细胞。空白对照组：就是不加细胞，只含培养基的组。同时你还要设置阴性对照组：只加细胞不加药物的组。具体的说明书网上都有，你可以参考看看。

如醉如痴的

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2 w) I! [" L. d. w- z0 J3 e& m/ W( ?8 _: K5 V, h% n- J  A6 k
您好，我想问一下，那个特定药物刺激，是什么药物呢