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9 X1 \" l, T6 s, l8 N1. 在96孔板中接种细胞悬液(100 ul /孔)，通常细胞增殖实验每孔约2000个细胞，细胞毒性实验每孔
9 H+ V% j& B( n5 F+ H约5000个细胞，具体每孔所用的细胞的数目，需根据细胞的大小，细胞增殖速度的快慢等因素决定)。
6 u' C- g9 p* N- z0 }2. 按照实验需要，进行培养并给予0-10ul特定的药物刺激，处理一段适当的时间(例如: 6,12, 24或48' {8 Y$ z  ?3 [) a9 P. w
小时)。
2 r; a* g' f  g6 ~4 t3. 每孔加入10ul CCK-8溶液。如果起始的培养体积为200ul，则需加入20ul CCK-8溶液，以此类推。可2 g  y. q! E4 j2 x  m
以用加相应量细胞培养基和CCK-8但不加细胞的孔作为空白对照，若担心所使用的药物会干扰检, h4 C. O. O# c: m, m
测，需设置加相应量细胞培养液、药物和CCK-8溶液但不加细胞的孔作为空白对照。7 M( G$ a; l4 i3 X# O
4. 在细胞培养箱内继续孵育1-4小时，具体时间可以通过预实验确定。预实验时可以在0.5、1、2和4小2 S4 T" ^& y- ^, N5 A4 Z% g
时后分别用酶标仪检测，然后选取吸光度范围比较适宜的一个时间点用于后续实验。1 s( e9 u! K+ m5 ~
5. 用酶标仪测定在450 nm处的吸光值，若无450nm滤光片，可以使用420-480nm的滤光片。如果样品
# {: z# }& P* a6 j2 e为高浑浊度的细胞悬液，可以使用大于600nm的波长，例如650nm，作为参考波长进行双波长测定。+ {4 h& {4 {% W9 S/ k7 ^2 F" F, P
6. 如果需要暂时不测定O.D值，可以向每孔中加入10ul 0.1M HCl溶液或者1% w/v的SDS溶液，避光保1 R0 V( I) R7 Z
存在室温，24小时内吸光度不会发生变化。( Y% o  c3 ^4 h