脐带间充质干细胞的培养

zhoufan025

我是一名新手，从上个月开始养脐带，我发现前三根脐带长势都还可以，试剂，培养条件这些都没有变，可是后面连着的五根脐带都不行，有的20天了还没办法原皿消化，只有几个细胞，细胞形态也不是以前那种细长型的，而是比较短宽，请问各位前辈有遇到过这种问题吗，可能的原因有哪些，我该怎么改进？

fenglinzhu

回复 weijunning 的帖子! J# z3 ]  d; N6 a1 G* r
1 V2 z+ \7 Q. w& h# U5 _2 q
建库的话考虑到以后可能给人用，所以不能加双抗的，双抗可能会让人过敏嘛。此外还不能用胎牛血清啊什么的，反正好多东西都不能用的。

月_幻影

楼主，原代培养不用加双抗的吧，我们做脐带的时候只是在清洗脐带的时候使用加了双抗的盐水，做原代的时候是不添加双抗的，而且加了双抗会对细胞的代谢有些影响，如楼主所说，既然自己严格执行了无菌操作，那么就要相信自己，再说即使原代的时候加了双抗，对于染菌的防治也是很低的，还不如规范操作来的安心一些！

deshenglll

回复 weijunning 的帖子
! H$ Z$ V4 T$ P- [% R' C7 i1 `7 z
7 R" w4 R; C1 W% V) O3 `2 k你要能做到不污染可以不加的。加抗生素对组织块有影响的。

weijunning

回复 deshenglll 的帖子" l# S9 K$ h% S' }
; |) |( o4 J/ |; y- F
为什么不能加抗生素？

xiaoyuwsp

自认为一切都没变时要考虑：1.一般外界气温有影响，天冷没有天暖长得好；2.并非种植的细胞越多越好，细胞多了可以造成营养不够，细胞长势不好或不长。有时为了救细胞，可以将细胞种植量少些，以保证营养。

deshenglll

回复 zhoufan025 的帖子
- S0 ^% T( \5 g6 a5 G' a. R3 J+ Y# y* [5 H* |6 D) O
我们培养都不加抗生素的。只要消毒比较彻底，没必要加的。做实验还好。要做库的话是不能加抗生素的。

feifa1314

回复 zhoufan025 的帖子1 H* e: W) `4 G- i

! B) L5 q1 C9 X" i8 ^* y+ o为什么那么早整合到一起？$ l4 o8 ]. k3 I( m4 z/ i( N$ K
细胞没有彻底爬出来之前，不适合整合。

tommary

过早的传代很容易导致细胞死亡，所以很多文献强调达到80%融合才能传代

zhoufan025

回复 deshenglll 的帖子
! N! B7 X1 n4 B% u4 _' N& x, o$ O  F- d1 |; M' m
你好！无菌操作我执行得很严格，标本来源的话我觉得连着这么多有问题的可能性也比较少，原代培养也加了双抗的。有一份标本五个10MM的皿我把它们整合到了一个皿，长势很不乐观，另外有一份标本我把两个10MM的皿整合到一个T25的培养瓶里面，第二天还看到有一些细胞贴壁，第三天看的时候基本上都浮起来了，没办法继续养，只能丢弃了，实在是搞不清楚原因啊。