请高手指点这段话是什么意思？谢谢

whs1230

简单的说，这一段文章就是介绍了作者构建一个质粒的过程。关于其中一些元件的功能可能还得看上下文才能知道，这段文章的大姨就是：! c7 {0 f% S- {3 ]3 p6 f
用BglII/KpnI双酶切，切除FLAG 标记的野生型 EosFP（质粒还是啥？）上的CMV启动子（常用的真核启动子）。然后退火加了磷酸化修饰的miniCMV 启动子序列（(bp
51 to +77 of the CMV promoter) ），将这一段退火序列加入到原切除的地方。这一元件构建完成后，ZraI 酶切，引入退火的加了磷酸化修饰的HRE元件。最后通过 KpnI/SspI/XbaI酶切以及Australian Genome Research Facility公司的测序来确认HRE 的拷贝。
7 ~8 F, D9 {( Q& a注：oligo退火知道是啥吧？从基因公司合成的序列退火形成一段双链DNA序列。
( b# Z1 ]( V2 [% K: J' i    作者应该有带有酶切位点的所构建的东东的图谱，结合那个玩意看就会明白了应该。

whs1230

回复 lingli318 的帖子$ N% V- N8 k3 u  h4 ~- A" _0 J
4 c4 c, G( a% k" z" Q4 b
不算麻烦，退火时可以直接把两条oligo丢到沸水里，然后关掉水浴锅电源使水温降到室温，也可以用PCR仪程序性降温，是单链核苷酸配对成dsDNA分子。大约1h。酶切酶连按照酶的说明书操作就可以了。酶切1-4小时，酶连过夜，然后转化感受态细胞做相关鉴定就可以。