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简单的说,这一段文章就是介绍了作者构建一个质粒的过程。关于其中一些元件的功能可能还得看上下文才能知道,这段文章的大姨就是:
R5 {% J7 \' N# A( h6 M% C% Z1 M用BglII/KpnI双酶切,切除FLAG 标记的野生型 EosFP(质粒还是啥?)上的CMV启动子(常用的真核启动子)。然后退火加了磷酸化修饰的miniCMV 启动子序列((bp 51 to +77 of the CMV promoter) ),将这一段退火序列加入到原切除的地方。这一元件构建完成后,ZraI 酶切,引入退火的加了磷酸化修饰的HRE元件。最后通过 KpnI/SspI/XbaI酶切以及Australian Genome Research Facility公司的测序来确认HRE 的拷贝。0 v+ g0 A; ^4 f, g7 o& S( J0 V, _* ^
注:oligo退火知道是啥吧?从基因公司合成的序列退火形成一段双链DNA序列。$ V9 ~% h, q/ S) v, E! G* u: w# r
作者应该有带有酶切位点的所构建的东东的图谱,结合那个玩意看就会明白了应该。 |
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