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[请教] 骨髓细胞核型分析 [复制链接]

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楼主
发表于 2014-1-15 17:13 |只看该作者 |倒序浏览 |打印
本帖最后由 goblinwang 于 2014-1-15 17:19 编辑
' C) J* `7 |. m' X4 `+ [( G
; P* `8 x1 H$ ]) @+ B: c6 { 40X10 请教各位前辈,骨髓细胞核型分析时,有哪些因素会影响滴片效果,下图是我做的一张片子,在40倍镜下拍摄
% I/ A$ h& \4 B2 ~$ R( \我想请教的问题:其一为什么一个视野下很多细胞似乎没破,染色体出来的很少是为什么,我滴片的高度大约是20cm( h8 b2 I2 ]+ H& o1 g+ ~
其二,用秋水仙素是细胞处于分裂中期是为了让染色体形态比较规整,明显,但是那些没有处于中期的细胞的染色体能否被观察到
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沙发
发表于 2014-1-15 18:20 |只看该作者
回复 goblinwang 的帖子
# Y2 r) i) _' n7 n4 w/ v  @& m8 ?; e& S" t
是抽骨髓细胞做的吗?分裂相少原因有很多,最重要的是低渗是否到位,低渗后红细胞是没有的,所以固定时细胞为纯白色,如果低渗过度,固定时细胞损失很多。还有用的片子要洗干净,不能有有机物,否则会影响分裂相破裂。
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藤椅
发表于 2014-1-16 12:31 |只看该作者
本帖最后由 细胞海洋 于 2014-1-20 00:54 编辑
2 g! m. n: T6 ]$ f- N4 A
2 P6 Q9 V+ k, A. Y% b) p- ~我先裂红然后在培养,用秋水仙素处理两小时,固定的时候是纯白色,而且感觉像是棉絮,我这张片子拍了,我感觉是低渗时间短了,不知道,您怎么理解,拨片我用无水乙醇-30浸泡,用的时候才拿出来,不过没酸处理,希望能听听您的意见,谢谢,,方便的话,交个朋友,有机会多向您学习学习,我才刚开始做核型,谢谢。。。。这张是我油镜拍的,您觉得这张小鼠的骨髓处于分裂中期了吗, QQ截图20140116123402.jpg ,刚才我师姐提醒我,似乎没看到姐妹染色单体,
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板凳
发表于 2014-1-16 13:28 |只看该作者
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回复 goblinwang 的帖子% H; T3 M0 |) X8 p& M0 d

& ?' _# `$ B/ p- u9 _这张图是中期,小鼠染色体全部为端着丝粒染色体,图中两条臂分开了,如果做G分带的话,这种分裂相不太合适
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发表于 2014-2-14 15:02 |只看该作者
请问goblinwang ,你做Gimesa染色了吗?

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地板
发表于 2014-2-15 10:18 |只看该作者
回复 goblinwang 的帖子/ j7 Z+ F% P* C8 D
3 e% m  c# r1 Q; v  j# b" Q
请看5楼

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小小研究员

7
发表于 2014-2-15 10:18 |只看该作者
回复 laner 的帖子
( E5 M' R7 U2 U; Q+ R
2 p& A/ n) E1 Y; n你回复谁 就点击对方回复帖子中的回复按钮 然后输入内容 像我这样
8 Z  Q, l% g& A6 _0 [( l7 r+ D+ \: W5 A7 e- S
否则他会看不到

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发表于 2014-2-15 14:24 |只看该作者
回复 laner 的帖子
. ?. y0 K: e' U! X
8 E3 ^- A1 ^. E5 _是的,感觉,不是很好,用油镜拍的片子都不是很干净,实验技术,不怎到哪儿出了问题,您能提出点整改意见吗,谈谈您的经验,操作过程中。哪些步骤很需要留心呢

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发表于 2014-2-19 11:21 |只看该作者
回复 goblinwang 的帖子' _5 v' P: ^; W; F

9 ^( ^: T! I8 K我最近也在做G显带,效果也不是很好,相互交流吧。我觉得低渗的时间非常重要,我之前低渗25min染色体分散不够,30min'有发现有断裂零碎的染色体,我打算做个时间的水平实验。还有就是吹打细胞低渗后要轻柔,不要把细胞吸到吸管上在吹打,很容易造成细胞的损失。制得好的玻片后,我觉得胰酶消化的时间和浓度对于染色和显带最为重要,这个时我一直没攻克的,不知道你有什么见解?
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发表于 2014-2-19 11:23 |只看该作者
回复 goblinwang 的帖子( d! q$ z6 J5 a: R; Y9 P
, x5 E+ k/ M9 L
片子都不是很干净,要注意玻片的洁净度,老化玻片时,最好密闭保存,还有就是染色液最好过滤后在使用。
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