骨髓细胞核型分析

goblinwang

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# [1 u2 m) k+ J3 a- T; i

2014-1-15 17:19 上传

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40X10

请教各位前辈，骨髓细胞核型分析时，有哪些因素会影响滴片效果，下图是我做的一张片子，在40倍镜下拍摄
9 r/ [+ J( L+ z' H* ?4 W9 ?1 `我想请教的问题：其一为什么一个视野下很多细胞似乎没破，染色体出来的很少是为什么，我滴片的高度大约是20cm7 U$ a6 D6 {* a- @- G. S
其二，用秋水仙素是细胞处于分裂中期是为了让染色体形态比较规整，明显，但是那些没有处于中期的细胞的染色体能否被观察到

dxb1985

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: Y7 x$ a0 x+ ?: y" t/ l6 j- O# B3 o7 C. @
是抽骨髓细胞做的吗？分裂相少原因有很多，最重要的是低渗是否到位，低渗后红细胞是没有的，所以固定时细胞为纯白色，如果低渗过度，固定时细胞损失很多。还有用的片子要洗干净，不能有有机物，否则会影响分裂相破裂。

goblinwang

1 _6 D0 E8 }, @0 I8 U: V8 _6 \1 M6 o1 u! \; Z
我先裂红然后在培养，用秋水仙素处理两小时，固定的时候是纯白色，而且感觉像是棉絮，我这张片子拍了，我感觉是低渗时间短了，不知道，您怎么理解，拨片我用无水乙醇-30浸泡，用的时候才拿出来，不过没酸处理，希望能听听您的意见，谢谢，，方便的话，交个朋友，有机会多向您学习学习，我才刚开始做核型，谢谢。。。。这张是我油镜拍的，您觉得这张小鼠的骨髓处于分裂中期了吗，

2014-1-16 12:34 上传

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，刚才我师姐提醒我，似乎没看到姐妹染色单体，

dxb1985

回复 goblinwang 的帖子, k- s. e9 R6 _0 w

  o  y! @  C4 _这张图是中期，小鼠染色体全部为端着丝粒染色体，图中两条臂分开了，如果做G分带的话，这种分裂相不太合适

laner

请问goblinwang ，你做Gimesa染色了吗？

细胞海洋

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6 O, J/ w' t; t5 ~
& w' C2 p( S# F! u5 |! C请看5楼

细胞海洋

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7 K, j8 R% i( G
) T7 M, t6 S( Q* b你回复谁 就点击对方回复帖子中的回复按钮 然后输入内容 像我这样
( W( t9 P9 ^7 I, [0 o/ e1 n* r% _; _* {6 N
否则他会看不到

goblinwang

回复 laner 的帖子* E# N' m  J! G) ?

$ m, k6 W, P! D" q! u  Y! h% w3 P是的，感觉，不是很好，用油镜拍的片子都不是很干净，实验技术，不怎到哪儿出了问题，您能提出点整改意见吗，谈谈您的经验，操作过程中。哪些步骤很需要留心呢

laner

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- a. x% _# }3 O/ h- b& e: f* A+ Z9 H
我最近也在做G显带，效果也不是很好，相互交流吧。我觉得低渗的时间非常重要，我之前低渗25min染色体分散不够，30min'有发现有断裂零碎的染色体，我打算做个时间的水平实验。还有就是吹打细胞低渗后要轻柔，不要把细胞吸到吸管上在吹打，很容易造成细胞的损失。制得好的玻片后，我觉得胰酶消化的时间和浓度对于染色和显带最为重要，这个时我一直没攻克的，不知道你有什么见解？

laner

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3 M5 H7 m, j9 T, M' y0 t( d: _% g: _" Z! r7 ?
片子都不是很干净，要注意玻片的洁净度，老化玻片时，最好密闭保存，还有就是染色液最好过滤后在使用。