拟胚体在无lif培养基中培养问题

922922922

请问各位前辈，先做拟胚体培养，培养2天后，拟胚体竟然贴壁了。请各位前辈，我的protocol如下，帮忙分析一下。# g# g! m! P  A; C) l; n

) r- d# e3 `0 h3 y+ X1、正常消化的IPS细胞，制备成单细胞悬液。" G% `% m# B9 u% Y5 X
2、接种于玻璃培养瓶，无lif的KSR培养基中。( M# o) U* H8 D& a+ d6 M
3、接种半小时后，晃动培养瓶防止贴壁。, g3 g7 n) u, E5 h6 S! Y
4、培养1天后，发现有很多拟胚体形态形成。; I4 X* }9 j* }( d+ r2 j# E
5、第二天观察时，几乎全部的拟胚体均已贴壁，并且部分的拟胚体疑似有分化迹象。+ Y" h2 d2 b  j3 e
6、我之前也做过几次的拟胚体培养，效果较好，但是接种的细胞浓度比这次的小一倍。  Z* I) E6 R5 @/ E/ B4 Y

plainxie192

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7 I1 G% H0 K6 N3 }1 ^4 g) T$ A; H, n
应该是你培养瓶的问题吧，反复利用的玻璃培养瓶需要用琼脂预处理才能防止贴壁，你也可以用一次性的细菌培养皿。petri皿。

ciweiyuan

瓶子的原因，要用低粘附性的才可以，否则就是要用琼脂铺板的板子才可以

922922922

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$ v5 |. N- _0 n0 S- ~2 g8 D/ h8 ^7 j, N2 q
谢谢您，非常感谢，麻烦您能否告诉我下，用多少浓度的琼脂糖，还有具体的protocol吗？

922922922

回复 plainxie192 的帖子" S, l- T8 l1 h: l* U# g3 S

& i1 M9 X+ s6 G2 K+ [, `! E% d! }您好，plainxie192，非常感谢您的回复和帮助，我还想问一下，应该如何处理玻璃培养瓶呢？

ciweiyuan

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7 s, N7 @5 F, D  P) B6 b7 u: a/ C
1 H  T1 ^, o$ j$ h2 m0.05%浓度

922922922

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) V$ i6 E. e+ ~# S% M" w+ k
. M# s1 A+ I) e& w8 f) z谢谢您，ciweiyuan。请问是0.05%的琼脂糖需要包被多长时间？有什么需要注意的吗？谢谢您，非常感谢！

ligangtiancai

我们实验室用的是Corning低粘附孔板