拟胚体在无lif培养基中培养问题

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请问各位前辈，先做拟胚体培养，培养2天后，拟胚体竟然贴壁了。请各位前辈，我的protocol如下，帮忙分析一下。
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1、正常消化的IPS细胞，制备成单细胞悬液。
! l; A! L  _: p) f" P; [3 {( k4 x! C& R4 K2、接种于玻璃培养瓶，无lif的KSR培养基中。
5 K( J- R" T7 D3 [- N3、接种半小时后，晃动培养瓶防止贴壁。: c) h6 _. _- d3 z3 M* y: w
4、培养1天后，发现有很多拟胚体形态形成。! ]9 F$ t. z+ R4 t* f
5、第二天观察时，几乎全部的拟胚体均已贴壁，并且部分的拟胚体疑似有分化迹象。
4 [8 W2 H, d1 x0 A# t7 S" e6、我之前也做过几次的拟胚体培养，效果较好，但是接种的细胞浓度比这次的小一倍。
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plainxie192

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3 J# Y0 ^: w4 F! I0 O  y3 b) X2 e7 ^2 Q/ P( G2 m
应该是你培养瓶的问题吧，反复利用的玻璃培养瓶需要用琼脂预处理才能防止贴壁，你也可以用一次性的细菌培养皿。petri皿。

ciweiyuan

瓶子的原因，要用低粘附性的才可以，否则就是要用琼脂铺板的板子才可以

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回复 ciweiyuan 的帖子3 M3 ~2 e/ T% `2 G
9 }" e6 F3 X6 Z8 ?; Q: @
谢谢您，非常感谢，麻烦您能否告诉我下，用多少浓度的琼脂糖，还有具体的protocol吗？

922922922

回复 plainxie192 的帖子
9 G/ m( J' i* L1 t' @4 I- L" l4 n* [- ~1 k
您好，plainxie192，非常感谢您的回复和帮助，我还想问一下，应该如何处理玻璃培养瓶呢？

ciweiyuan

回复 922922922 的帖子
  k5 R, g& R& S* b/ S' ^* g1 K
# r  ~; t9 p( v3 U+ ^% P3 j, _0.05%浓度

922922922

回复 ciweiyuan 的帖子. \+ S1 G8 |. w3 [

1 }2 z2 N% s- e/ x8 r谢谢您，ciweiyuan。请问是0.05%的琼脂糖需要包被多长时间？有什么需要注意的吗？谢谢您，非常感谢！

ligangtiancai

我们实验室用的是Corning低粘附孔板