拟胚体在神经元培养液中诱导出心肌细胞

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各位老师好，小女在尝试IPS诱导神经元，采用诱导分化经典途径，即IPS-拟胚体-诱导分化培养。但是很意外的在诱导培养神经细胞14d时，出现貌似心肌细胞一样的，整个拟胚体在非常规则的自律性跳动。兴奋之余，又很想搞清楚到底是什么原因，请各位前辈看下我的protocol，究竟是哪里出了问题：( c$ a2 b0 o$ [! q/ N
1、IPS正常培养
8 a3 F6 D9 i# o! h% y6 H  q4 D 2、诱导拟胚体8天* g2 D6 S; w- |2 {: |* h
3、在6孔板中诱导，出现“心肌细胞”的这空，无lif培养液培养3天，之后更换神经元培养液，在14d时出现自律性搏动。4 c; O+ K* Y$ X; a8 |
我的神经元培养液配方如下：. K3 @: M3 a: m+ u& M1 h# O
100 mL
' Y. d* g& T! y1 {) N  N' e0 DNeurobasal medium        97 mL
8 x& E( m7 B# {0 a* [. y6 }' b; z50X B27        2 mL, r& e* [1 T1 Y# ?; m
100X GlutaMAX        1 mL
9 H5 }" l! x1 Q5 M8 \* N100X P/S        1 mL

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回复 wanglimaomao 的帖子0 i0 P; S# d2 T+ {7 X0 Y8 R' X
  X" `/ d5 ?6 ?% ]
谢谢您 ！

Jonathan

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' I& o4 O9 T+ }: o7 |6 a' V- |4 T- `
同意

wanglimaomao

拟胚体时间有点长了，时间长了拟胚体自发分化，肯定会有中胚层的细胞诱导分化，比如心肌细胞，内皮细胞等。建议你你配体时间稍微缩短一些，另外，在心肌诱导分化的文献中，是不是也有B27？而且所谓的神经诱导分化培养基，成分的量还是不够的。所以，建议补加一些专门神经诱导分化的细胞因子。可能会加速分化过程。祝实验顺利！

ligangtiancai

这个情况很正常，miPS在没有LIF的情况下会自动向3胚层分化，你加入神经元培养基只能部分提高EB向Neuron的分化率，但还是会有心肌细胞形成的，我们的结果中使用20%FBS的EB培养基在不加任何细胞因子的情况下到第14天会有5.5%左右的细胞是cTnI阳性

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7 t) S" l& w5 J: C& ]" Y$ j- P7 ]
谢谢chichao0000，我做的IPS是小鼠。按照您说的，已经记录下7分钟的视频了+ ]! O8 K2 {( A# z$ K

chichao0000

我没有做过ips，但是考虑到ips的多能性，在这些ips中可能存在心肌祖细胞，在诱导拟胚体过程中可能是这些心肌祖细胞繁殖了，出现了波动性心肌样细胞。建议如果想进一步证实是心肌细胞可以进行成心肌检测（心肌marker等）。想用ips诱导出搏动的心肌细胞应该也不容易，你应该是很认真也很幸运，因此最好记录下来（搏动的视频）。2 c  P& n1 J: W0 M, d% m2 W
还有个问题：你的细胞来源种属是人的还是鼠的？
+ z0 L& E( \1 P6 A" x祝实验顺利' e0 {2 X9 N. t1 Y5 i