拟胚体在神经元培养液中诱导出心肌细胞

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各位老师好，小女在尝试IPS诱导神经元，采用诱导分化经典途径，即IPS-拟胚体-诱导分化培养。但是很意外的在诱导培养神经细胞14d时，出现貌似心肌细胞一样的，整个拟胚体在非常规则的自律性跳动。兴奋之余，又很想搞清楚到底是什么原因，请各位前辈看下我的protocol，究竟是哪里出了问题：
% c+ J0 t  }- \" m4 P; R% S 1、IPS正常培养& q( T+ v6 V/ j) ?
2、诱导拟胚体8天
; f7 ]1 W  x6 x7 C/ ? 3、在6孔板中诱导，出现“心肌细胞”的这空，无lif培养液培养3天，之后更换神经元培养液，在14d时出现自律性搏动。' d* d3 y) h) h3 U7 F" ~2 T9 W
我的神经元培养液配方如下：) ^! [/ ?$ S# u( b; Z& v" f
100 mL+ c& A  [% M2 v# x9 U
Neurobasal medium        97 mL1 l8 L/ a" Y( G. E; c
50X B27        2 mL
9 Z- G$ B  X9 s+ [100X GlutaMAX        1 mL, v% @9 \4 {0 u7 Y$ S' J7 o7 H
100X P/S        1 mL

chichao0000

我没有做过ips，但是考虑到ips的多能性，在这些ips中可能存在心肌祖细胞，在诱导拟胚体过程中可能是这些心肌祖细胞繁殖了，出现了波动性心肌样细胞。建议如果想进一步证实是心肌细胞可以进行成心肌检测（心肌marker等）。想用ips诱导出搏动的心肌细胞应该也不容易，你应该是很认真也很幸运，因此最好记录下来（搏动的视频）。9 Q' c9 J2 y) \' n2 d9 x
还有个问题：你的细胞来源种属是人的还是鼠的？7 i- {5 r- r' j0 ~! w2 k
祝实验顺利
  r0 r  B, @& j- F4 j

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+ k7 j) \) a: K2 N$ |3 n9 }; @  P9 t7 S
谢谢chichao0000，我做的IPS是小鼠。按照您说的，已经记录下7分钟的视频了
6 y; u# ~- }3 e4 M

ligangtiancai

这个情况很正常，miPS在没有LIF的情况下会自动向3胚层分化，你加入神经元培养基只能部分提高EB向Neuron的分化率，但还是会有心肌细胞形成的，我们的结果中使用20%FBS的EB培养基在不加任何细胞因子的情况下到第14天会有5.5%左右的细胞是cTnI阳性

wanglimaomao

拟胚体时间有点长了，时间长了拟胚体自发分化，肯定会有中胚层的细胞诱导分化，比如心肌细胞，内皮细胞等。建议你你配体时间稍微缩短一些，另外，在心肌诱导分化的文献中，是不是也有B27？而且所谓的神经诱导分化培养基，成分的量还是不够的。所以，建议补加一些专门神经诱导分化的细胞因子。可能会加速分化过程。祝实验顺利！

Jonathan

回复 ligangtiancai 的帖子6 k' R% w4 l" X& G' V' l

) d4 e6 l7 n8 U同意

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回复 wanglimaomao 的帖子' k! c) \8 i. ?$ ^* h

' t9 ?3 B8 `& B8 n) l% Y# R7 T: x谢谢您 ！