拟胚体在神经元培养液中诱导出心肌细胞

922922922

各位老师好，小女在尝试IPS诱导神经元，采用诱导分化经典途径，即IPS-拟胚体-诱导分化培养。但是很意外的在诱导培养神经细胞14d时，出现貌似心肌细胞一样的，整个拟胚体在非常规则的自律性跳动。兴奋之余，又很想搞清楚到底是什么原因，请各位前辈看下我的protocol，究竟是哪里出了问题：
2 S% h# C, C% a* N 1、IPS正常培养
5 \5 z7 R2 K& p8 m) ~+ H, q 2、诱导拟胚体8天
) B, ~, N: `5 E9 v  \7 Z- k 3、在6孔板中诱导，出现“心肌细胞”的这空，无lif培养液培养3天，之后更换神经元培养液，在14d时出现自律性搏动。  b1 P' t: [3 _
我的神经元培养液配方如下：/ R* W/ d5 F- u8 V5 @$ C
100 mL
/ i( B. t2 ?! I4 t# I2 @" I4 G" yNeurobasal medium        97 mL: Q: Z9 T2 e2 J- k3 h
50X B27        2 mL" Z5 a+ u2 n: ~5 _
100X GlutaMAX        1 mL
6 W0 a0 N7 Q; t# e: _100X P/S        1 mL

chichao0000

我没有做过ips，但是考虑到ips的多能性，在这些ips中可能存在心肌祖细胞，在诱导拟胚体过程中可能是这些心肌祖细胞繁殖了，出现了波动性心肌样细胞。建议如果想进一步证实是心肌细胞可以进行成心肌检测（心肌marker等）。想用ips诱导出搏动的心肌细胞应该也不容易，你应该是很认真也很幸运，因此最好记录下来（搏动的视频）。
9 \) ]1 T1 E+ B: `' p# o3 v# w还有个问题：你的细胞来源种属是人的还是鼠的？
5 ]5 j8 a" ]" _! g" |祝实验顺利
4 ~. R6 {7 |: |+ F; X2 M0 n

922922922

回复 chichao0000 的帖子
7 ?  h' V" a+ G) W9 k* ?2 x- Z
+ g, P; S- W! J% \8 h$ d" O0 ?谢谢chichao0000，我做的IPS是小鼠。按照您说的，已经记录下7分钟的视频了
, J" e. E4 i/ ?) L5 B( Z

ligangtiancai

这个情况很正常，miPS在没有LIF的情况下会自动向3胚层分化，你加入神经元培养基只能部分提高EB向Neuron的分化率，但还是会有心肌细胞形成的，我们的结果中使用20%FBS的EB培养基在不加任何细胞因子的情况下到第14天会有5.5%左右的细胞是cTnI阳性

wanglimaomao

拟胚体时间有点长了，时间长了拟胚体自发分化，肯定会有中胚层的细胞诱导分化，比如心肌细胞，内皮细胞等。建议你你配体时间稍微缩短一些，另外，在心肌诱导分化的文献中，是不是也有B27？而且所谓的神经诱导分化培养基，成分的量还是不够的。所以，建议补加一些专门神经诱导分化的细胞因子。可能会加速分化过程。祝实验顺利！

Jonathan

回复 ligangtiancai 的帖子1 W1 b3 M' S4 ~3 @8 d: q
" v* F% K0 v5 D! ]* a- K, @8 B0 P
同意

922922922

回复 wanglimaomao 的帖子
3 }) Y  L! X8 Q  R: X8 h0 d. l# g+ D
4 s: H% a" U+ l4 b6 b. u$ g% c. N4 q$ J谢谢您 ！