拟胚体在神经元培养液中诱导出心肌细胞

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各位老师好，小女在尝试IPS诱导神经元，采用诱导分化经典途径，即IPS-拟胚体-诱导分化培养。但是很意外的在诱导培养神经细胞14d时，出现貌似心肌细胞一样的，整个拟胚体在非常规则的自律性跳动。兴奋之余，又很想搞清楚到底是什么原因，请各位前辈看下我的protocol，究竟是哪里出了问题：6 V  S. A" {4 u1 f. O
1、IPS正常培养" {8 `7 ^+ R3 W9 m: y0 X" R( N
2、诱导拟胚体8天- y9 m; N/ s- w: h3 B( `' m0 u. e0 [
3、在6孔板中诱导，出现“心肌细胞”的这空，无lif培养液培养3天，之后更换神经元培养液，在14d时出现自律性搏动。
, ?' j4 I1 Z1 M4 p 我的神经元培养液配方如下：: M5 g: U: q; S5 O( q, u- T) o. D
100 mL
! D8 ^1 ]/ @4 INeurobasal medium        97 mL8 y& s4 Q1 ~( W
50X B27        2 mL9 A: Q2 i/ e, }) k3 H3 G' K
100X GlutaMAX        1 mL
3 i/ M% m1 }! g$ ]100X P/S        1 mL

chichao0000

我没有做过ips，但是考虑到ips的多能性，在这些ips中可能存在心肌祖细胞，在诱导拟胚体过程中可能是这些心肌祖细胞繁殖了，出现了波动性心肌样细胞。建议如果想进一步证实是心肌细胞可以进行成心肌检测（心肌marker等）。想用ips诱导出搏动的心肌细胞应该也不容易，你应该是很认真也很幸运，因此最好记录下来（搏动的视频）。% g# _4 |; m- H5 D7 T
还有个问题：你的细胞来源种属是人的还是鼠的？
6 `& Y, n: i) z: G祝实验顺利
# e% H: C7 S& j8 i0 U

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回复 chichao0000 的帖子! ]. P5 A, u( }3 y' |$ E
# t' i8 e9 U8 C) W5 M
谢谢chichao0000，我做的IPS是小鼠。按照您说的，已经记录下7分钟的视频了1 M& w, W9 h. M0 M

ligangtiancai

这个情况很正常，miPS在没有LIF的情况下会自动向3胚层分化，你加入神经元培养基只能部分提高EB向Neuron的分化率，但还是会有心肌细胞形成的，我们的结果中使用20%FBS的EB培养基在不加任何细胞因子的情况下到第14天会有5.5%左右的细胞是cTnI阳性

wanglimaomao

拟胚体时间有点长了，时间长了拟胚体自发分化，肯定会有中胚层的细胞诱导分化，比如心肌细胞，内皮细胞等。建议你你配体时间稍微缩短一些，另外，在心肌诱导分化的文献中，是不是也有B27？而且所谓的神经诱导分化培养基，成分的量还是不够的。所以，建议补加一些专门神经诱导分化的细胞因子。可能会加速分化过程。祝实验顺利！

Jonathan

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4 c# D3 {' m/ [2 E
) d  E& a3 n  \同意

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谢谢您 ！