拟胚体在神经元培养液中诱导出心肌细胞

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各位老师好，小女在尝试IPS诱导神经元，采用诱导分化经典途径，即IPS-拟胚体-诱导分化培养。但是很意外的在诱导培养神经细胞14d时，出现貌似心肌细胞一样的，整个拟胚体在非常规则的自律性跳动。兴奋之余，又很想搞清楚到底是什么原因，请各位前辈看下我的protocol，究竟是哪里出了问题：3 U, E: d6 p4 l5 ?9 K8 o
1、IPS正常培养4 t5 W2 ]( f2 b
2、诱导拟胚体8天" N" r4 S% s1 o: B/ N, W$ f
3、在6孔板中诱导，出现“心肌细胞”的这空，无lif培养液培养3天，之后更换神经元培养液，在14d时出现自律性搏动。
# D, K) o3 O  a 我的神经元培养液配方如下：% M9 H/ C; j* j( b/ |2 M; q
100 mL
1 C5 U# b2 A& D; |9 H; eNeurobasal medium        97 mL
8 t) _4 v9 w6 w2 T7 H0 X50X B27        2 mL9 V% k& U  z! `8 k# Y1 O
100X GlutaMAX        1 mL
# l5 f4 H  J: P, o100X P/S        1 mL

chichao0000

我没有做过ips，但是考虑到ips的多能性，在这些ips中可能存在心肌祖细胞，在诱导拟胚体过程中可能是这些心肌祖细胞繁殖了，出现了波动性心肌样细胞。建议如果想进一步证实是心肌细胞可以进行成心肌检测（心肌marker等）。想用ips诱导出搏动的心肌细胞应该也不容易，你应该是很认真也很幸运，因此最好记录下来（搏动的视频）。
4 o4 U$ U4 J" h! \% Y6 |4 M2 ]还有个问题：你的细胞来源种属是人的还是鼠的？
+ i% b  L4 G% M; o祝实验顺利9 I3 |  ^% ~7 c7 p/ n

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回复 chichao0000 的帖子* I5 P, w* j4 l, C! h  ]- F$ n- m

! W: n) T6 a0 y* v: z2 g3 {谢谢chichao0000，我做的IPS是小鼠。按照您说的，已经记录下7分钟的视频了; f: ~7 Q/ P  u2 N

ligangtiancai

这个情况很正常，miPS在没有LIF的情况下会自动向3胚层分化，你加入神经元培养基只能部分提高EB向Neuron的分化率，但还是会有心肌细胞形成的，我们的结果中使用20%FBS的EB培养基在不加任何细胞因子的情况下到第14天会有5.5%左右的细胞是cTnI阳性

wanglimaomao

拟胚体时间有点长了，时间长了拟胚体自发分化，肯定会有中胚层的细胞诱导分化，比如心肌细胞，内皮细胞等。建议你你配体时间稍微缩短一些，另外，在心肌诱导分化的文献中，是不是也有B27？而且所谓的神经诱导分化培养基，成分的量还是不够的。所以，建议补加一些专门神经诱导分化的细胞因子。可能会加速分化过程。祝实验顺利！

Jonathan

回复 ligangtiancai 的帖子  A& n, Y$ C! J& F3 t/ i' A
9 K5 w) E6 g" X+ z
同意

922922922

回复 wanglimaomao 的帖子, z; `  l) ~- ?6 B8 }2 A
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谢谢您 ！