实验室台盼蓝溶液

指下人生

细胞计数的台盼蓝溶液主要成分是什么？在超净台外边计数会被污染吗？

flylover1221

台盼蓝溶液，是台盼蓝用生理盐水稀释至0.4%的溶液。有潜在致癌危险，请穿实验服并戴一次性手套操作。但在实验台外操作不会产生污染。观察完后及时清理实验台，擦洗计数板和盖玻片就可以了。

月_幻影

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. k( n* a: c2 G( H( q9 e  n0 g" s! s7 ]( N7 b0 x5 F. g, E- m  ~; x% w) O
台盼蓝溶液的主要成分当然是台盼蓝啦，细胞计数可以在超净台外进行……

zhucexiaji

我的观点跟三楼有些不同，养细胞用生理盐水干嘛？下面我跟你说说台酚蓝的具体原理及配置和注意事项。
  s: P2 W4 z4 p  R! {' {1 ~( B: b7 B, U) J. S! L" R. j8 o" ]
台盼蓝染色：- ?) [3 h' t- ?- U
如果细胞膜不完整、破裂，台盼蓝染料进入细胞，细胞变蓝，即为坏死。如果细胞膜完整，细胞不为台盼蓝染色，则为正常细胞或凋亡细胞。此方法对反映细胞膜的完整性，区别坏死细胞有一定的帮助。
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用品方法如下：
+ b: T: `" |1 `6 J& O4 R1. 配置台盼蓝使用液：
: L" D$ q2 L, B3 D: e6 l3 I8 F  X% i称取4g台盼蓝，加少量蒸馏水研磨，加双蒸水至100ml，用滤纸过滤，4度保存。使用时。用PBS稀释至0.4%。
) H& ]' y  |+ s 1 T4 u% m" H/ d0 c7 r# u
2. 镜检计数：+ u) d; S. _: l; Z6 M. R
首先制备单细胞悬液。并作适当稀释（10 *6 细胞/ml）；然后取9滴细胞悬液移入小试管中，加1滴0.4%台盼蓝溶液，混匀；最后，在三分钟内，用计数板分别计数活细胞和死细胞# X6 B- N, }& P( d' K' H3 E
5 p) ^1 r4 z( ~6 k% F/ p
3. 结果：
9 U$ @" ^& S8 v  c( N  ]镜下观察，死细胞被染成淡蓝色，而活细胞拒染。+ q2 _" S8 K: _/ g5 A, f: W
根据下式求细胞活力：0 C6 P2 k" Z( P+ r1 C2 a% ]2 H
  2 s) O6 [' F; H) c
活细胞率（%）= 活细胞总数/（活细胞总数+死细胞总数）*100 ( v) P0 ^2 O) L0 }( [# e) O
  
* O9 z5 B1 }( \8 o4. 注意事项：
1 }7 T, Q, Z! K5 m0 A9 s: ^' X台盼蓝染细胞时，时间不宜过长。否则，部分活细胞也会着色，会干扰计数。
- x5 {3 U1 v, B3 r6 }, ]0 v台盼蓝, ~$ t$ T0 i# ]' u- @8 `7 b/ O* B0 y
主要用来鉴定原代培养细胞时，
. f3 z0 t4 r( g1 y  L% L+ ^细胞分离后的存活情况
% s5 m& Q. A- j( F5 C5 l，$ B4 u# J) r7 l4 F
用
& b; k- c0 A$ W  {0.4%
3 S8 S' B& ^7 k7 F台盼蓝) X! y  Y+ ]" F4 O7 g9 ^: ~
直接染色，在显微镜下观察即可，活细胞不被染色。方便易用，因此在实验室中比较常用，尤其在心肌细胞原代培养中。台盼兰染色法价格低廉，操作简单，又不用无菌操作，做这个实验只要是把显微镜调好了，细胞浓度调好了就不会有问题，是一个养细胞的入门实验。台酚蓝有较强毒性，使用注意不要污实验台及器具。
- `) W9 Q( Q) I6 a* k! c8 X4 G% p

genetics2014

中英文名称:台盼蓝（Trypan Blue)或称台盼兰、锥虫蓝；分子式：C34H24N6O14S4Na4；分子量: 960.82，是细胞活性染料，常用于检测细胞膜的完整性。还常用于细胞是否存活。活细胞不会被染成蓝色，而死细胞会被染成淡蓝色。0 t9 f# r% }3 I  y
镜检计数时，单细胞悬液和台盼兰溶液按照1:1混合，然后立即放显微镜下计数，一般是随机计数100个细胞。

指下人生

谢谢！！

jyfeicun

呵呵

dandan9230

在超净台外面操作即可。