实验室台盼蓝溶液

指下人生

细胞计数的台盼蓝溶液主要成分是什么？在超净台外边计数会被污染吗？

flylover1221

台盼蓝溶液，是台盼蓝用生理盐水稀释至0.4%的溶液。有潜在致癌危险，请穿实验服并戴一次性手套操作。但在实验台外操作不会产生污染。观察完后及时清理实验台，擦洗计数板和盖玻片就可以了。

月_幻影

回复 指下人生 的帖子# r0 }: U, G9 }' N2 z

; [5 Q/ D' B2 x) ]1 J5 _+ z' R台盼蓝溶液的主要成分当然是台盼蓝啦，细胞计数可以在超净台外进行……

zhucexiaji

我的观点跟三楼有些不同，养细胞用生理盐水干嘛？下面我跟你说说台酚蓝的具体原理及配置和注意事项。
5 @! }% u9 y2 P1 H/ X* z1 H  f! n( z7 A5 e- G
台盼蓝染色：
# n# h# ~6 O1 v2 Y! B2 a如果细胞膜不完整、破裂，台盼蓝染料进入细胞，细胞变蓝，即为坏死。如果细胞膜完整，细胞不为台盼蓝染色，则为正常细胞或凋亡细胞。此方法对反映细胞膜的完整性，区别坏死细胞有一定的帮助。
$ W! N8 F) e% V9 w4 o6 X8 G. X ) d" Y; j8 F5 C
用品方法如下：  ~' S. M4 E2 I) a
1. 配置台盼蓝使用液：# B4 [1 i( y9 ?/ E
称取4g台盼蓝，加少量蒸馏水研磨，加双蒸水至100ml，用滤纸过滤，4度保存。使用时。用PBS稀释至0.4%。! P2 U6 a* A% [' `" |/ {4 H% g, B

5 o5 E) J. b8 w7 y! Z# }# W/ e* \2. 镜检计数：
. d+ @$ W" t  `) ]( ^首先制备单细胞悬液。并作适当稀释（10 *6 细胞/ml）；然后取9滴细胞悬液移入小试管中，加1滴0.4%台盼蓝溶液，混匀；最后，在三分钟内，用计数板分别计数活细胞和死细胞# ~6 ~! m& a0 k' T% f; f3 D3 t

0 M, y3 J' |8 ^& D  P$ g6 W! @3. 结果：
9 b( [- C2 ~1 G; e6 c3 o镜下观察，死细胞被染成淡蓝色，而活细胞拒染。
; Y& L- q, A; T% \) C根据下式求细胞活力：
6 V# P4 @! d+ h2 r/ C' V2 C  4 k/ @, P$ f. K1 r* ~
活细胞率（%）= 活细胞总数/（活细胞总数+死细胞总数）*100
5 Q$ e7 k/ [, N4 W  7 [; s! K2 G: \, H
4. 注意事项：
  r5 N# t7 e; N台盼蓝染细胞时，时间不宜过长。否则，部分活细胞也会着色，会干扰计数。, ^3 A# P  a8 t' W3 t7 Q
台盼蓝
/ t$ j: h$ X3 p* I% A主要用来鉴定原代培养细胞时，" N2 Z0 N+ y5 a0 f' B/ S& h
细胞分离后的存活情况
2 C8 ^' F" V* z6 [, Y. Q，
( r  k) p! w, G' v, x' V3 G( X用+ m# E" O+ q2 K$ i6 c
0.4%
5 v7 A* [& D9 }台盼蓝
& ~" w8 M7 Z( I直接染色，在显微镜下观察即可，活细胞不被染色。方便易用，因此在实验室中比较常用，尤其在心肌细胞原代培养中。台盼兰染色法价格低廉，操作简单，又不用无菌操作，做这个实验只要是把显微镜调好了，细胞浓度调好了就不会有问题，是一个养细胞的入门实验。台酚蓝有较强毒性，使用注意不要污实验台及器具。& p! r5 m+ }1 o# {- ~, X- d& V

genetics2014

中英文名称:台盼蓝（Trypan Blue)或称台盼兰、锥虫蓝；分子式：C34H24N6O14S4Na4；分子量: 960.82，是细胞活性染料，常用于检测细胞膜的完整性。还常用于细胞是否存活。活细胞不会被染成蓝色，而死细胞会被染成淡蓝色。! o) q, y- i: r" [1 l
镜检计数时，单细胞悬液和台盼兰溶液按照1:1混合，然后立即放显微镜下计数，一般是随机计数100个细胞。

指下人生

谢谢！！

jyfeicun

呵呵

dandan9230

在超净台外面操作即可。