实验室台盼蓝溶液

指下人生

细胞计数的台盼蓝溶液主要成分是什么？在超净台外边计数会被污染吗？

flylover1221

台盼蓝溶液，是台盼蓝用生理盐水稀释至0.4%的溶液。有潜在致癌危险，请穿实验服并戴一次性手套操作。但在实验台外操作不会产生污染。观察完后及时清理实验台，擦洗计数板和盖玻片就可以了。

月_幻影

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* z" k- F! V1 q% s" ^5 _, [8 }; j" K' r
台盼蓝溶液的主要成分当然是台盼蓝啦，细胞计数可以在超净台外进行……

zhucexiaji

我的观点跟三楼有些不同，养细胞用生理盐水干嘛？下面我跟你说说台酚蓝的具体原理及配置和注意事项。
5 z5 ]5 v: \+ v1 n
6 m3 J' N- [$ F" \) \" W7 r, Q: @: z台盼蓝染色：
9 O$ Q* y; q! T1 V如果细胞膜不完整、破裂，台盼蓝染料进入细胞，细胞变蓝，即为坏死。如果细胞膜完整，细胞不为台盼蓝染色，则为正常细胞或凋亡细胞。此方法对反映细胞膜的完整性，区别坏死细胞有一定的帮助。+ s  h: F6 K- A4 K# q- Q0 W
) U- c0 d% ~; ~# [
用品方法如下：
* B  d4 d' R1 R. |1 D9 k/ w1. 配置台盼蓝使用液：! {! Q# i! B$ |0 h
称取4g台盼蓝，加少量蒸馏水研磨，加双蒸水至100ml，用滤纸过滤，4度保存。使用时。用PBS稀释至0.4%。
1 A+ a; |" i* Z( x
2 D) u; C7 x+ h- b3 Q2. 镜检计数：2 K8 t( z. u$ ~, v: ?% m
首先制备单细胞悬液。并作适当稀释（10 *6 细胞/ml）；然后取9滴细胞悬液移入小试管中，加1滴0.4%台盼蓝溶液，混匀；最后，在三分钟内，用计数板分别计数活细胞和死细胞
( d. h* @* V; `- M5 @" C& b3 n5 x8 S' V' J* u
3. 结果：
( l5 M. r# z: g+ N4 @2 Y, z) H镜下观察，死细胞被染成淡蓝色，而活细胞拒染。0 i; u# X5 {" }- m. G
根据下式求细胞活力：
3 n6 J, `9 P6 Q: ~  * l/ ?2 C+ M: Q6 L, c
活细胞率（%）= 活细胞总数/（活细胞总数+死细胞总数）*100
, X* q  X/ y: s0 q  
' s, |% H' a) h, x( J. V4. 注意事项：
' _# R1 o) G- a4 _# q+ ^台盼蓝染细胞时，时间不宜过长。否则，部分活细胞也会着色，会干扰计数。
2 O& |9 B6 `: t/ [- h8 X台盼蓝/ x2 w: G- @, N  o; S* H& Y
主要用来鉴定原代培养细胞时，
! l- A" q8 Y- s3 I5 }1 q细胞分离后的存活情况
1 n  ?% v$ v7 t9 H  e0 N，% H5 B3 M, |, V, H
用
* ^8 Z6 C/ u0 c' Q. Y* `0.4%
# w: ^: Q; H, Z台盼蓝
1 ^- J# {# ^; {& r! o3 Y直接染色，在显微镜下观察即可，活细胞不被染色。方便易用，因此在实验室中比较常用，尤其在心肌细胞原代培养中。台盼兰染色法价格低廉，操作简单，又不用无菌操作，做这个实验只要是把显微镜调好了，细胞浓度调好了就不会有问题，是一个养细胞的入门实验。台酚蓝有较强毒性，使用注意不要污实验台及器具。
" s: J, c% U* [6 A9 x1 H

genetics2014

中英文名称:台盼蓝（Trypan Blue)或称台盼兰、锥虫蓝；分子式：C34H24N6O14S4Na4；分子量: 960.82，是细胞活性染料，常用于检测细胞膜的完整性。还常用于细胞是否存活。活细胞不会被染成蓝色，而死细胞会被染成淡蓝色。% ^/ r7 w6 O4 d! v7 W) D( U
镜检计数时，单细胞悬液和台盼兰溶液按照1:1混合，然后立即放显微镜下计数，一般是随机计数100个细胞。

指下人生

谢谢！！

jyfeicun

呵呵

dandan9230

在超净台外面操作即可。