求助小鼠ES细胞培养基的配方以及传代的方法

jc_484

想咨询大家小鼠ES细胞的培养基的配方，以及消化的时候所用的酶和消化时间

孙帅帅

  R$ v( H" O6 k: p; O# S9 d  K' g- d6 a1 u# t7 ]% }# Q
  如果你养的细胞少的话，市场上有现成的，你直接买点不就好了！  关于消化用EDTA就好了，消化5分钟！

不倒翁

回复 孙帅帅 的帖子, ^/ V. v" |+ H8 C1 x2 H( I

/ t: E8 Q- I5 X$ m) g1 V2 C小鼠用EDTA？

fuyinsheng

如果在滋养层上培养的话可以尝试以下配方
: ]$ \1 m) \' A/ h& e/ x6 a* y培养基：带滋养层的DMEM/F12，10% Knockout血清，7%FBS，NEAA，谷氨酰胺，巯基乙醇，LIF（后四项按产品说明书加就行）
  ~5 Z# G4 [  R. C0 `2 e* f% k消化用0.25%胰酶消化4min

wbj1983

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" j9 u, n  m: N. C: O! F$ ~& P3 e5 g6 T3 n6 x/ M/ m
基础培养液：knockout DMEM' l  b0 {% K9 M! x9 f6 u
FBS:20%" [+ n9 l4 @0 o
NEAA) M- j/ [0 g# S
Glutamin3 d0 N1 q5 N: P" S- O  R5 H. C! _" q
b-巯基乙醇* Q  S9 E! Z) k* w, q" N
LIF:1000IU/ML
8 H7 X; v+ E, @% ~# ~
3 Q: y) P* x, _. l消化：0.05% typsin-EDTA, 消化3min

孙帅帅

回复 不倒翁 的帖子0 H3 ]+ e. h6 _- g- n* q( Q
/ k" T0 K, Q1 p' M
看错了   还以为是人的HES呢

Serene

回复 jc_484 的帖子& P' }/ M6 B4 p6 ^4 V

" n& j& @$ p- H9 _DMEM（Gibco） 15%KSR（Gibco）非必需氨基酸，谷氨酰胺，β-巯基乙醇，丙酮酸钠，LIF
: w$ b) S) z) ^5 j这是用于维持培养的，要是分化培养的话就将15%KSR改为20%FBS，且不加LIF: M" F/ S) c/ Z: o; t8 n/ I7 [: |
0.02 %EDTA-胰蛋白酶消化3分钟就足够了，轻轻拍打培养器皿，使克隆成单个细胞，