hES细胞系H1形成EB的方法

shaozi402

请问：人胚胎干细胞形成EB的方法有哪些？目前我也查到一些，1. 用V型的96孔板；2. 用细胞刮片法；3. 悬滴法；4. stem cell的AggreWellTM400孔板。这些方法中1,4的成本太高；2形成的EB大小不一；3形成的拟胚体又太小，干细胞数量有限。请问还有没有一些更好的方法，用更经济的方法形成大小均一的EB？谢谢！
# q$ C2 v- R, ]" s, W5 l) s1 L

nichifanlema2

回复 shaozi402 的帖子5 p- E  q8 w  Z
) U# k* F  I7 {# u
如果仅仅是做EB形成，鉴定其EB形成能力，悬滴法就可以满足需要。

shaozi402

回复 nichifanlema2 的帖子
0 }# ~9 }. w' P) b1 l: C8 {& k9 q) G5 E( M( M5 d! p% ~, R  C
谢谢，主要是想用EB向视杯方向分化，

zb_ming

高大上的实验，赞一个!

流云阿凯

这个要看你的实验技术，我们实验室用的都是普通的传代方式，把细胞吹散，大小比平时传代稍大，然后在人的ES medium 里面悬浮四天即可，不加BFGF，下面这个是我们实验室的参考文献。
; F; U, ]3 |4 F) BDifferentiation of Neural Precursors and Dopaminergic Neurons from Human Embryonic Stem Cells

shaozi402

回复 流云阿凯 的帖子; l2 E: O# @& x  i, e* @7 s6 i
. n0 o' ]3 g) a/ j
谢谢您，在看文章中有个疑问向请教一下：
5 l4 [% a4 I$ o4 K8 u# ?3. methods$ ?' f5 O7 l6 I6 d: j8 ?. P6 X
3.1 make ESC aggregates1 m& @! U5 }# N- i' k; i* R
   8.Pipette up and down against the bottom of the tube to break up the colonies into 200um pieces.
' d  }* G; K% ^( s, V: v就是说dispase消化细胞过后经过吹打并没有将细胞分成单个，而是形成一个个小的团块？break up the colonies into 200um pieces, 如何掌握把细胞团块消化成这么大的小块？

流云阿凯

消化过程不消化成单细胞，至于团块的大小，也没有特别固定的大小。我们一般的标准就是比传代的团块稍大。不能太小。但是也不能过大。这个完全是看经验的，我也没有办法给你详细描述！如果需要的话我下次可以分化后给你照张图片

流云阿凯

回复 shaozi402 的帖子2 Y( Y* t) r% U1 ?4 `

" U1 {5 O* ^* _$ K  v$ O5 W8 ~7 e
) p1 L/ t' F# p消化过程不消化成单细胞，至于团块的大小，也没有特别固定的大小。我们一般的标准就是比传代的团块稍大。不能太小。但是也不能过大。这个完全是看经验的，我也没有办法给你详细描述！如果需要的话我下次可以分化后给你照张图片

shaozi402

回复 流云阿凯 的帖子
. f1 t6 h4 U7 U4 L+ V: y; `+ w( v
; t7 l# |1 r! \: f. K* u太感谢了，期待您的照片

watchen198891

回复 流云阿凯 的帖子
2 ^. g  E) b. N3 A9 h; c6 q/ T4 M- |# ]5 z" p
我想问一下，你做EB的时候是否会出现大量细胞的死亡？我最近也在做，但是接进去很多大的团块儿，第二天大多数就直接死了。