hES细胞系H1形成EB的方法

shaozi402

请问：人胚胎干细胞形成EB的方法有哪些？目前我也查到一些，1. 用V型的96孔板；2. 用细胞刮片法；3. 悬滴法；4. stem cell的AggreWellTM400孔板。这些方法中1,4的成本太高；2形成的EB大小不一；3形成的拟胚体又太小，干细胞数量有限。请问还有没有一些更好的方法，用更经济的方法形成大小均一的EB？谢谢！
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nichifanlema2

回复 shaozi402 的帖子1 x: O8 ]) {% m' b

* I8 V: `5 k3 z如果仅仅是做EB形成，鉴定其EB形成能力，悬滴法就可以满足需要。

shaozi402

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& ^1 F# W: N+ j4 F
: \& t& h& |: R! f5 _2 \7 l谢谢，主要是想用EB向视杯方向分化，

zb_ming

高大上的实验，赞一个!

流云阿凯

这个要看你的实验技术，我们实验室用的都是普通的传代方式，把细胞吹散，大小比平时传代稍大，然后在人的ES medium 里面悬浮四天即可，不加BFGF，下面这个是我们实验室的参考文献。  K6 u# Y( i% S! _' W$ ]9 X/ w
Differentiation of Neural Precursors and Dopaminergic Neurons from Human Embryonic Stem Cells

shaozi402

回复 流云阿凯 的帖子2 y  V* R7 I& D
9 |3 D! R1 U# U. u
谢谢您，在看文章中有个疑问向请教一下：% P  ]% x5 O8 y9 i
3. methods
% U9 i5 A% G# b1 \3.1 make ESC aggregates8 d) |* Q! F; e+ F8 X! p. e
   8.Pipette up and down against the bottom of the tube to break up the colonies into 200um pieces.3 g' n4 N$ H2 a( C: a
就是说dispase消化细胞过后经过吹打并没有将细胞分成单个，而是形成一个个小的团块？break up the colonies into 200um pieces, 如何掌握把细胞团块消化成这么大的小块？

流云阿凯

消化过程不消化成单细胞，至于团块的大小，也没有特别固定的大小。我们一般的标准就是比传代的团块稍大。不能太小。但是也不能过大。这个完全是看经验的，我也没有办法给你详细描述！如果需要的话我下次可以分化后给你照张图片

流云阿凯

回复 shaozi402 的帖子2 h1 v+ Y& J  t1 H
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2 C8 X% ~- K' y) h0 p
消化过程不消化成单细胞，至于团块的大小，也没有特别固定的大小。我们一般的标准就是比传代的团块稍大。不能太小。但是也不能过大。这个完全是看经验的，我也没有办法给你详细描述！如果需要的话我下次可以分化后给你照张图片

shaozi402

回复 流云阿凯 的帖子4 C! ]" L1 u9 [3 r! K
/ }2 W6 d) H, o& D9 p5 s8 l
太感谢了，期待您的照片

watchen198891

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- v' @: {& [+ O" _+ f1 X* w) o$ T5 J6 ^5 X- g: S
我想问一下，你做EB的时候是否会出现大量细胞的死亡？我最近也在做，但是接进去很多大的团块儿，第二天大多数就直接死了。