求教：关于邓宏魁课题组化合物诱导iPS的问题

suxiaomei

各位iPS领域的同仁们，有人成功重复出邓的Science报道的VC6TFZ诱导m-iPSc吗？
$ \4 }# |7 U( @. G) O6 H; G( {近日论坛已经有人发起讨论，貌似没有得到阳性答复。本人再起一贴，希望可以召唤出已经成功的大虾，来赐教一番！！
) U, X7 y; m+ J6 h0 r6 r: i4 N  @, D& {3 P3 F2 ^$ V, R2 `
首先抛砖引玉，简单说说我做的工作——因为是利用化合物诱导，所以成败似乎就在于培养基。我们使用的小分子，是从sigma和millipore购买，培养基配方是完全按照邓的文章配置，材料是普通小鼠的原代细胞，因为没有GFP标签，所以只是从形态上判断，小分子的添加顺序和时间是按照邓文章中的schematic进行的。形态上，我觉得经历了MET转化，内援CDH1的高表达也证实了这一点。特别在加入DZnep处理一周之后，很多克隆表现很明显的homogeneity，d40的样品qPCR检测显示OCT，SALL4，LIN28,KLF4等等毫无变化，再2i转换之前，实验室爆发污染，不幸终止。。。但是已经拿到的仍然不符合，因为按照邓的文章，SALL4是前期激活的的，2i促进naive状态的转化，在非naive的状态下，大部分干性基因也毫无响应。" j2 W1 y( U+ ?0 ]

0 a3 z  `0 G9 B) k, j+ j0 p3 v总之我的结果就是这样，以上也是我个人的浅见。望知情者不吝赐教!

zhen022

cell的那个文章？觉得肯定没那么好重复啊

watchen198891

你确定你出现了克隆？还有时间点的把握我怎么感觉有些出入呢？在你加入DZnep的时候有检测过Sox2,SALL4与OCT-4的表达没有，我的理解是必需先激活Sox2与SALL4，然后这两个基因才会和小分子一起作用激活Oct-4，只能在这三个基因都有表达的时候加入DZnep才能有效果吧，这个小分子的加入和前面的基因一起激活了Naong的表达。所以我觉得你出现的克隆并不是意义上有多能性类似ES的细胞克隆，我觉得在加入DZnep的时候最好检测一下前面三个基因的表达情况吧，再继续做后面。这个实验不是那么好重复的啊。没看到有人回复是成功了的。

suxiaomei

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; I. }8 J& Q9 M6 l/ p0 n, }7 \' RSALL4是早期激活基因，我们确实拿不到这个结果。这可能是失败的原因，也可能是很多人失败的原因。只不过我觉得大家不肯详谈牵涉数据的东西，即使是失败的。邓也应该写一篇NATURE PROTOCOL.

watchen198891

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% N7 k9 u  F: i8 D# h: U  d
4 i' G" N; }  q5 n这个你可以直接写信请教吧，至于失败的原因有很多，但是激活的机制是确定了的，还是要一步一步的去激活这些基因，首先找到没有激活这个基因的原因，还有你用的方法是否就是一致的，多做平衡实验吧。你要重复这个实验，我觉得你应该用一样的细胞系还有同样的小分子还有方法。

markllq

这个问题论坛里之前有人发帖讨论过，情况貌似跟楼主有些类似，贴上来一起讨论：http://www.stemcell8.cn/thread-76837-1-1.html

suxiaomei

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5 t2 x& H/ X. ]. F7 K3 i1 h6 t7 e* n) `
本着重复试验的目的，培养基小分子浓度等等是尽量一致的。如果有明显不同的地方，应该是隐蔽的protocol

watchen198891

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0 @. k& K' c+ K6 `& c$ Q5 N- }& ]) f- l% q& m6 ^8 L
据我了解，有些小分子是买不到的，需要合成，你买到的小分子有些虽然是同类，但是结构还是有差异的。

suxiaomei

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& J( G: Z$ W6 |" A
小分子肯定都是合成的，这些小分子虽然可能出自不同的公司，但是其化学结构式以及CAS号都是完全一致的。

watchen198891

回复 suxiaomei 的帖子& y  c7 o. Y9 i+ {0 j
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嗯，那现在就是实验过程，祝你早日成功！