求助：iPS诱导成功后挑取、增殖的方法，求方法详解，谢谢

a279915845

1.iPS细胞诱导成功后怎样才能把它们挑取出来让它们增殖呢，是直接在显微镜下挑还是消化的方法，直接在显微镜下挑难度太大了，2.ES和iPS培养基的配方？版本太多了，求指导，急！谢谢！

不倒翁

直接在显微镜下挑，挑取的单克隆吸出来放到0.15%的胰酶里面消化五分钟，吹散后种到培养皿里面。维持的培养基看你自己试验需求了。不同版本的都可以维持下去。

a279915845

回复 不倒翁 的帖子/ Q8 V4 A* E% I3 e$ N2 g6 M3 V9 Y/ H1 A
: d! }) b6 {! b- s
使用什么器材挑取呢，我之前使用的是10微升的枪挑取特别的困难，能不能传授点经验；另外，方不方便提供一下您的ES和iPS培养基的配方，谢谢

Andyhigh

a279915845 发表于 2014-3-25 15:41 ! k8 V0 T, X. F' K
1.iPS细胞诱导成功后怎样才能把它们挑取出来让它们增殖呢，是直接在显微镜下挑还是消化的方法，直接在显微镜 ...

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同求高手解析，顶下！！！

creatine

楼主是用那种方法诱导的IPS？是人还是小鼠呢？

不倒翁

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6 T% P- u$ Q0 R  C7 t: T
) N( _, U1 e1 `Fisher的玻璃针，烧了之后掰弯，再拉断。诱导的时候培养基是DMEM+15%gibco血清+NEAA+Glutmax+Sodium Pyruvate+β巯基乙醇+lif，挑出来之后在feeder上用这个培养基也可以，或者用2i+lif（austin他们的文章里面有配方F12：neuronbasal1:1+CHIR+PD+N2+B27+NEAA+Glutmax+Sodium Pyruvate+β巯基乙醇+lif）也行。2i可能有促进完全重编程的作用，养一阵子细胞就会变得很均一，状态很好。

不倒翁

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9 E. H4 ^/ x8 _+ _1 n) @% R
4 i9 T1 D% D4 ?- M这是小鼠的，人的挑取是一样的，但是消化还有medium就不一样了啊

a279915845

回复 creatine 的帖子  X- U; d* F8 x7 |8 O/ {7 g( E
1 R  \& k5 Y( J0 N
我是使用慢病毒转染诱导的，是大鼠的

a279915845

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3 k) o: x  [! }& s! u3 X) a1 {( g$ r0 E# T& i) B
非常感谢

a279915845

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7 i: Q' q) S# F$ q# l% `# s还不是特别的明白怎样挑克隆的，能不能再解释详细些，谢谢