求助：iPS诱导成功后挑取、增殖的方法，求方法详解，谢谢

a279915845

1.iPS细胞诱导成功后怎样才能把它们挑取出来让它们增殖呢，是直接在显微镜下挑还是消化的方法，直接在显微镜下挑难度太大了，2.ES和iPS培养基的配方？版本太多了，求指导，急！谢谢！

不倒翁

直接在显微镜下挑，挑取的单克隆吸出来放到0.15%的胰酶里面消化五分钟，吹散后种到培养皿里面。维持的培养基看你自己试验需求了。不同版本的都可以维持下去。

a279915845

回复 不倒翁 的帖子9 x" A' R) u  p' b
! h- K. j6 q  ?
使用什么器材挑取呢，我之前使用的是10微升的枪挑取特别的困难，能不能传授点经验；另外，方不方便提供一下您的ES和iPS培养基的配方，谢谢

Andyhigh

a279915845 发表于 2014-3-25 15:41 + a1 D5 _5 k( p1 {# P% H  l
1.iPS细胞诱导成功后怎样才能把它们挑取出来让它们增殖呢，是直接在显微镜下挑还是消化的方法，直接在显微镜 ...

! |' i/ ^: a% `1 R- R! z% s/ R同求高手解析，顶下！！！

creatine

楼主是用那种方法诱导的IPS？是人还是小鼠呢？

不倒翁

回复 a279915845 的帖子
' r$ T8 V% e5 f+ [/ U/ [/ v, G
! W1 y8 x; ^" a$ {Fisher的玻璃针，烧了之后掰弯，再拉断。诱导的时候培养基是DMEM+15%gibco血清+NEAA+Glutmax+Sodium Pyruvate+β巯基乙醇+lif，挑出来之后在feeder上用这个培养基也可以，或者用2i+lif（austin他们的文章里面有配方F12：neuronbasal1:1+CHIR+PD+N2+B27+NEAA+Glutmax+Sodium Pyruvate+β巯基乙醇+lif）也行。2i可能有促进完全重编程的作用，养一阵子细胞就会变得很均一，状态很好。

不倒翁

回复 a279915845 的帖子
6 \( _3 J3 \. t
& L6 g5 ^5 G7 i2 c这是小鼠的，人的挑取是一样的，但是消化还有medium就不一样了啊

a279915845

回复 creatine 的帖子
# x) f: Q0 Y+ E1 {) ~" I5 N, ~0 I) G( p, V' I/ @
我是使用慢病毒转染诱导的，是大鼠的

a279915845

回复 不倒翁 的帖子
0 ]' @# {8 Z* L% M% q7 L) [1 d  C
  i/ o/ X8 h& r0 w% H非常感谢

a279915845

回复 不倒翁 的帖子
2 V0 g: h: i3 ~, m
' ]) `$ m4 x# R) ]$ t还不是特别的明白怎样挑克隆的，能不能再解释详细些，谢谢