大鼠生精干细胞的培养

sunny218

各位高手们，我才开始做SSC，做了两次都不是很成功，想向各位高手们请教一下。* c; m7 G) [& ]+ J8 ]# u$ }) u5 O% S
1，要用什么方法去分离纯化大鼠的生精干细胞会比较好？
" A2 P. w9 ?& B2 U1 E  d; F2，用什么培养基才能在体外长期培养？
0 S; H6 c  G) T7 S+ K/ Z, [) V7 D7 i. q9 H, X* _2 m4 K

7 T* O' G' I8 F# w9 K; c% o          谢谢各位啦！！！

490096812

刚开始，你就用普通的就可以

sunny218

普通的什么啊？DMEM？还是DMEN/F12  ?

490096812

都行，我们第一种撒

细胞海洋

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你回复谁 就点击对方回复帖子中的回复按钮 然后输入内容 像我这样
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0 P' Z, \# ?( V否则他会看不到. R# R$ L3 S! g! N+ l

sunny218

回复 细胞海洋 的帖子9 j: u& s# x/ _+ P, f/ h0 [. F7 [% T
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好的，谢谢！

sunny218

回复 490096812 的帖子/ O. R" R2 k! j2 `% t2 ~+ e
+ R7 n% f) n& r- T
那你们适用什么方法分离纯化的啊？怎个过程都是要无菌的吧？我可能是不太熟悉，经常会污染，要么就是细胞第二天就都死啦！！！谢谢你的回复啊！！

w343989328

回复 sunny218 的帖子# z+ w( D3 \9 M( o' D* U

+ i4 w& ~8 Y, A, M7 v3 W% s: W为什么会那么容易污染呢？你分原代细胞，培养基里面肯定要加双抗的啊。起码传个一两代再把双抗去掉吧

w343989328

纯化的话，视你的目的而定。如果只是单纯的建系，而且还处于摸索阶段，那么我建议你用差速贴壁法。这是比较经济的做法，而且现在大鼠SSC的marker尚无定论。SSC的培养体系比较复杂，具体的你可以看点文献再做决定。brinster团队和T.shinohara都是这方面的大牛，Dym Martin也有不少工作

qingchen

回复 sunny218 的帖子5 K! Z4 j7 X1 q9 Z9 m7 U
( L' C& v, J4 I4 m3 u; x# U0 a# _
两种抗生素没加么？还是液体没有消毒？还是消毒方式有问题？还是操作时未注意无菌？总之污染的因素很多！有时候即使液体有一点细菌的话也会感染的！另外你用什么牌子的滤膜：？滤膜不干净也可能造成污染啊！