ips 诱导

陆萌

一直在做猴子的ips诱导，使用慢病毒pspax2/pMD2.G 和四个转录因子的质粒包装病毒，之后用miliipore的超滤柱浓缩，但是一直没成功，求指点~~

scottist

首先确定你的质粒能包装出有活性的慢病毒，可以在感染慢病毒2-3d后提RNA检测下转入的四因子是否过表达；如果慢病毒有活性，那就可能是滴度的问题了，测一下包装后的滴度，毕竟蛋白超滤柱只能浓缩10倍左右，如果滴度太低就要考虑更换一下慢病毒包装系统了；另外原代培养的细胞传的代数太多也会增加诱导的难度，你可以考虑使用下文献报道的提高诱导效率的方法，例如：加P53阻断剂（siRNA之类的），加ROCK的抑制剂Thiazovinvin，加ALK5的抑制剂SB43142，加巴尔普罗酸等；最后，你用人的四因子诱导猴子的iPS是否也会使得效率低下。

wangshumin12311

回复 陆萌 的帖子" O5 R- x: u4 ^9 u

6 t- X, v9 o' E6 e+ z' t猴子很不好做，关键是培养体系的问题，我之前做了一年多猴子的直到最后才摸到合适的条件，，，，，一般报病毒没问题。。。。

陆萌

回复 wangshumin12311 的帖子
# Y/ m7 w6 [7 u; l
5 J# \2 s: U+ |' a$ s请问您用的什么培养体系呢，我之前用灵长类干细胞培养基以及文献报道的20%KSR+bFGF试过，效果都不好

陆萌

回复 scottist 的帖子/ \# d/ J+ a& a) z$ Y6 q

* u3 [) ^$ b$ t1 A6 ~$ ?多谢指点！包装病毒我有GFP的平行对照，也用对照病毒感染了，能看到皮肤细胞有荧光，您提到的提高诱导效率的方法我尝试一下。非常感谢!

wangcs

诱导体系中建议添加mir302和200c效果很好，试试能不能从北大邓博要来猴的因子；培养体系目前有点杂，可添加的东西太多，还是从2i开始试吧！

1175374245

你好，请问有人做过将猴子的皮肤成纤维细胞诱导成ips细胞的经验么？本人目前在做，希望能一起交流！

细胞海洋

回复 1175374245 的帖子
8 X; R( h, ?: c/ U: M6 Y" @3 j! }! k: |! A3 X
建议你发新帖提问 并详细说明你的问题

a422778

wangshumin12311 发表于 2014-4-10 18:01 - C9 q( ^5 j5 m" ^3 o. v
回复 陆萌 的帖子
3 ~. t# x" j  o6 R) W; q$ J
- t' C& |% P  }2 Y& r猴子很不好做，关键是培养体系的问题，我之前做了一年多猴子的直到最后才摸到合适的条件 ...

$ m, R) e. G. _/ y7 s) h' F
请问你用的什么培养体系呢

陆萌

回复 1175374245 的帖子
# v' h1 @. b! P! l. ^
8 |! O, V5 _( m( ^我跟你做的应该差不多，你是用慢病毒载体么？可以交流下