ips 诱导

陆萌

一直在做猴子的ips诱导，使用慢病毒pspax2/pMD2.G 和四个转录因子的质粒包装病毒，之后用miliipore的超滤柱浓缩，但是一直没成功，求指点~~

scottist

首先确定你的质粒能包装出有活性的慢病毒，可以在感染慢病毒2-3d后提RNA检测下转入的四因子是否过表达；如果慢病毒有活性，那就可能是滴度的问题了，测一下包装后的滴度，毕竟蛋白超滤柱只能浓缩10倍左右，如果滴度太低就要考虑更换一下慢病毒包装系统了；另外原代培养的细胞传的代数太多也会增加诱导的难度，你可以考虑使用下文献报道的提高诱导效率的方法，例如：加P53阻断剂（siRNA之类的），加ROCK的抑制剂Thiazovinvin，加ALK5的抑制剂SB43142，加巴尔普罗酸等；最后，你用人的四因子诱导猴子的iPS是否也会使得效率低下。

wangshumin12311

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3 W* Z! o. Y  m猴子很不好做，关键是培养体系的问题，我之前做了一年多猴子的直到最后才摸到合适的条件，，，，，一般报病毒没问题。。。。

陆萌

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8 n) Y& u% @* U+ Q+ U: }' r8 D0 m' L5 _5 E) R7 a$ Q) m! l
请问您用的什么培养体系呢，我之前用灵长类干细胞培养基以及文献报道的20%KSR+bFGF试过，效果都不好

陆萌

回复 scottist 的帖子4 _5 G) {5 |# Z9 {0 T

3 Q# }& E: E( v3 V$ S多谢指点！包装病毒我有GFP的平行对照，也用对照病毒感染了，能看到皮肤细胞有荧光，您提到的提高诱导效率的方法我尝试一下。非常感谢!

wangcs

诱导体系中建议添加mir302和200c效果很好，试试能不能从北大邓博要来猴的因子；培养体系目前有点杂，可添加的东西太多，还是从2i开始试吧！

1175374245

你好，请问有人做过将猴子的皮肤成纤维细胞诱导成ips细胞的经验么？本人目前在做，希望能一起交流！

细胞海洋

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8 g) q+ D* ^9 h' J# D# B3 b4 I4 t" [' [! N* c
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a422778

wangshumin12311 发表于 2014-4-10 18:01
+ }' O, ]$ ^* l3 y2 }8 P0 k回复 陆萌 的帖子: G0 W& j8 e8 Y& Z

6 j6 J* q; C" t猴子很不好做，关键是培养体系的问题，我之前做了一年多猴子的直到最后才摸到合适的条件 ...

7 W* k8 l; [6 r  a请问你用的什么培养体系呢

陆萌

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. x/ C% H  \/ s  k3 ?& h9 {) D$ D! Y
我跟你做的应该差不多，你是用慢病毒载体么？可以交流下