求助，为什么我贴壁法养不出来细胞？

月_幻影

我们的做法是，将脐带去除残血后剥除血管，然后剥出华通氏胶，将华通氏胶充分剪碎后铺瓶（我们是直接铺到培养瓶中），然后在培养箱中倒置培养，第二天加入培养基后再将培养瓶正过来培养即可，加入培养基后静置培养一周左右，这段时间不去碰它，一周左右以后基本可以看出有部分细胞爬出，几次换液后会大量增殖。。。这个方法基本和书上介绍的相似，书上要求的是倒置培养3~4小时后再正过来加上培养液，其实倒置培养也是为了让组织块贴壁的，不过LZ就这样让组织块在安全柜内吹风个人觉得不妥，这样很容易就会使组织块脱水了，还怎么爬出细胞呢，而铺瓶后在培养箱中倒置培养最起码给了它一个比较适宜的环境让它去贴壁，所以我觉得LZ有必要改进下这个20分钟的吹风过程；再就是原代培养的前几天组织块其实是很容易漂浮起来的，所以再加入培养基后的一段时间内最好不要去碰它，先静置培养。。。希望可以帮到LZ。。。

月_幻影

回复 龟酱 的帖子+ K* q% {5 B. X$ p( y( u! C8 b: ~/ C
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个人认为加10ml是可以的，不过加液的时候注意倾斜培养皿，在低端缓缓加入培养液慢慢放平培养皿使溶液缓慢覆盖整个皿底，整个过程要轻要慢；LZ不用担心组织块飘起的问题，因为一定会有一部分飘起来的，我这边在做培养的时候通常原代后第一次换液会飘起很多组织块的，不过已经贴壁爬出细胞的组织块是不受影响的，反而应该及时清理掉这些飘起的组织块，因为这些漂浮的组织块和一些细胞碎片什么的往往含有一些有害的物质，他们会影响原代细胞的生长，应该及时清除。
0 n" U( [4 k8 O最后祝LZ成功！

月_幻影

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6 P1 ?3 d: P. F' }, m8 z; l呵呵，当然不会啦，倒置培养只是在刚铺瓶的时候，还没有加培养液，而且，把剔出来的华通式胶剪碎后是很黏的（肉糜状），直接铺到瓶里都就粘在上面了，所以倒置培养的这段时间组织块也不会掉下来的。PS.兄台是不是没用过组织块法？

月_幻影

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: k0 q! z4 {2 U1 O
6 [( ~+ \/ Q, H4 S6 h$ l4 N铺瓶后直接加上培养基的话瓶里的组织块很容易飘起的，飘起来如何做原代？所谓的倒置培养是指铺瓶后放入培养箱倒置培养4~6h左右，当然在这期间是可以加入培养基的，但也是加入少量并倒置，并不是一开始就让培养液与铺瓶组织接触的，这样更有利于组织块粘附。

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/ G8 Z, ^! r- W$ M

; o) ^, P0 r# W' ~$ b' Y回复 guanyufei 的帖子# m3 `( s7 P$ t! n; @
' B/ n' M) E' D  d/ ?; |$ `
我想问下这位朋友你问这个问题的意思是？我真心没明白你这个问题的真谛、+ A- x0 m, W* l9 C& w% ]
找了个图片，你看一下吧、
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月_幻影

回复 guanyufei 的帖子8 d& Y$ u. e. ]3 Q
& n& p! S" v  k
直接正面培养也是可以的，我以前也试过，不过，刚开始培养的几个小时还是建议不要加培养基，不然组织块很容易飘起来（如果组织块都飘起来了又怎么做原代呀），毕竟刚刚铺瓶粘附不牢固；如上图示，倒置的时候加培养基也是不让它与组织块接触的；希望可以帮到你、

月_幻影

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/ u% {- @: E- M) f8 M
3 \: {1 a* t3 I. ^- S9 y5 ~怎么会贴到瓶子上壁呢？组织块铺瓶的时候都是铺在瓶底上的，且铺瓶用的都是剪得很碎的组织、粘附性很好，倒置也不会掉下来的、

月_幻影

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) c, x8 p! q% N& G& M) I& M
  w; K  x4 _" j7 g% e嘿嘿，不客气，相互学习~