关于胚胎干细胞消化用accutase的中止消化问题

shaozi402

我们胚胎干细胞的消化用accutase，用培养基中止消化；但是发现这样有点浪费培养基，培养基很贵的。考虑是不是可以用DMEM/F12来替代胚胎干细胞的培养基来中止消化呢？或者可以用其他的试剂来中止消化？求解，谢谢！

Jonathan

早就说过这个问题了。accutase不是用培养基终止的，你加培养基，只是把accutase稀释了。我一直用F12稀释，一直没问题

sc-cxw

accutase消化不需要终止消化，换种说法即说消化到最佳时间时，只需要加入相应的适当体积的培养基继续培养即可。

shaozi402

回复 Jonathan 的帖子% _  E) n6 F4 |6 h$ n7 y  f$ r

' B+ a' N& u" g5 w; _+ s: x& J& P2 {我用F12试了一下，确实可以。

shaozi402

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( z! \$ X' T, ^3 e6 F4 I5 T) U: j- N9 p0 N4 G, {' P- x7 Q
谢谢

shaozi402

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$ o6 u- T- K. C  v不需要离心去除吗？
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sc-cxw

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不需要

bubble_w

请问accutase消化到什么程度终止消化最佳？是把细胞吹下来，还是刮下来？

shaozi402

回复 bubble_w 的帖子; |# q; {+ h8 ~  L8 w7 C) S$ k
6 Y4 |) H8 u$ X, B' y
克隆球周边卷曲，大约3-5min，即可用细胞吹打下来。

bubble_w

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$ k. G' K+ G! D+ L; X
0 `4 T- K" n/ Z, R! Z# Y$ \6 D, _( q吹打下来之后 克隆是小的团块还是已经变为单细胞