求助-小鼠颗粒细胞体外培养

moluxingke

最近在做小鼠颗粒细胞的体外培养，查了一些方法：! t, ]' ?( t' _: [: y- ?
PMSG处理21-22天的小鼠，然后大约46-48h后取卵巢。: h1 u" X3 _# \7 g
刺破卵巢中较大的卵泡，使COC释放出来，然后用移液器反复吹吸，使颗粒细胞和卵母细胞分离，移走卵母细胞，将颗粒细胞离心收集。% g( S$ r; F% w6 g8 t
然后PBS洗涤一下，继续离心。
. f) b6 z/ h/ r9 f6 w" g. h9 c3 xDMEM/F12培养基重悬，培养。/ M2 `: ^4 ?8 T$ v3 S5 ~) K
然后我想问一下：1  这种方法收集的大多是围绕卵母细胞的卵丘颗粒细胞，壁层颗粒细胞比较少，而且刺破卵泡过程中，有较多的颗粒细胞损失掉了，怎么才能收集较多的颗粒细胞，如果要铺一个12孔板的话，至少需要多少只小鼠？) y" M8 F2 g1 Z7 J+ l! ^
    2 因为小鼠已经经过PMSG处理了，也就是说颗粒细胞已经对PMSG产生应答一次了，那么在体外实验中如果我还打算用FSH处理这些颗粒细胞，颗粒细胞对FSH的响应会不会有一定程度的减弱？
" @* y; S3 q4 k3  原代分离培养过程中要不要加双抗？
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moluxingke

回复 dxb1985 的帖子
7 ~3 p4 h+ n" l  m8 D2 q- @/ f7 d
谢谢帮助，多扎几次得到的COC会多一些，我现在很想知道扎卵泡过 程中散落到培养基中的那些颗粒细胞怎么收集，因为会混有很多细胞碎片，大的碎片可以通过过滤或是离心除去，但是小的就不好办，我再查查其他文献吧。

moluxingke

回复 luyue6453 的帖子! w0 A5 s! Z: R& ?0 {: J

4 b" d! G4 e  X; n实验中用的条件性敲除小鼠，想做一些关于FSH或是LH诱导下颗粒细胞中的一些调控机制，所以打算用体外培养的方式来做做看，需要转病毒或是抑制剂处理，来对体内的结果进行一下验证。小鼠的COC可以直接用透明质酸酶消化，我现在就是想多收集一些颗粒细胞，毕竟敲除小鼠没有那么多，担心实验中不够用。