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拟胚体实验   [复制链接]

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小小研究员

楼主
发表于 2014-5-28 21:03 |只看该作者 |倒序浏览 |打印
求助:哪个大神能提供一下拟胚体实验的详细步骤啊,我做EB时怎么没几天就贴壁分化了呢,中间需不需要别的处理
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沙发
发表于 2014-5-29 08:25 |只看该作者
回复 a279915845 的帖子6 {( H* z7 j6 J7 m9 M
0 ~% d4 |1 @- U6 a3 V6 G4 }
hiPSC和miPSC步骤 不一样,不知道你养的是哪一种?
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小小研究员

藤椅
发表于 2014-5-29 08:33 |只看该作者
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( y2 o& W7 S' O6 H6 Z; r- z1 G" ]( _- Y$ @
我养的是大鼠iPS细胞,求详细步骤,谢谢

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板凳
发表于 2014-5-29 08:35 |只看该作者
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& _2 [; g( L# e6 m6 q
* j' [. p$ |. M- smiPSC直接加入到分化液中即可,用低吸附培养皿或培养板,密度最好不要太高;hiPSC最好在低吸附的培养皿或培养板中加ipsc培养液中继续培养12-24h,形成一些细胞团后,再移入分化液中培养,这样形成EB的数量更多一些。你养的没几天就贴壁分化了可能有两种原因:1,培养皿或培养板低吸附处理效果不好,我们用的corning的低吸附6孔板从未出现EB贴壁的情况;2,EB密度过大,出现粘连,最后形成一大团,下沉贴壁,这样的话减少一些密度,或者经常摇动。
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报纸
发表于 2014-5-29 08:47 |只看该作者
选低吸附的培养皿或培养板,我们用分子克隆实验使用的平板,挺好
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地板
发表于 2014-5-29 10:22 |只看该作者
回复 scottist 的帖子+ s: D  @2 }3 \3 \! @
6 X  n. U9 `) W; R$ N! M  v7 x
非常感谢你的帮助,我使用的是普通的低粘附的6孔板,如果是6孔板一般您按什么密度铺啊,中间换不换液啊,怎么换液啊,离心?分化液就是去除LIF的ES营养液吧?
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发表于 2014-5-29 10:58 |只看该作者
回复 a279915845 的帖子8 r- K! p* ^3 u! J

- @8 G8 b, ]. s( @miPSC的话,6孔板每孔加2X10的5次方,换液有人采用半数换液,这样貌似损失很多,可以用离心换液,最好不要用枪头,用移液管,轻吸轻吹。分化液我们以前用加15%FBS的DMEM,只去掉LIF,还加KSR的话,分化效果可能不如加FBS效果好。
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发表于 2014-5-29 10:58 |只看该作者
回复 a279915845 的帖子7 k* i$ a1 s* A( t) S" k( h# n
1 C0 v- d0 y  ^$ P
miPSC的话,6孔板每孔加2X10的5次方,换液有人采用半数换液,这样貌似损失很多,可以用离心换液,最好不要用枪头,用移液管,轻吸轻吹。分化液我们以前用加15%FBS的DMEM,只去掉LIF,还加KSR的话,分化效果可能不如加FBS效果好。

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发表于 2014-5-29 11:00 |只看该作者
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) A$ N* b% f$ I3 v* e6 q! A3 |& M. T9 [/ l$ P: n
miPSC的话,6孔板每孔加2X10的5次方,换液有人采用半数换液,这样貌似损失很多,可以用离心换液,最好不要用枪头,用移液管,轻吸轻吹。分化液我们以前用加15%FBS的DMEM,只去掉LIF,还加KSR的话,分化效果可能不如加FBS效果好。大鼠iPS我没养过,EB培养步骤就不敢妄言了。

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发表于 2014-5-29 12:19 |只看该作者
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  ~) h. L( k6 S' [5 K) Q# U
' ^  N4 m2 i; ]& d5 s  ]非常感谢您
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