拟胚体实验

a279915845

求助：哪个大神能提供一下拟胚体实验的详细步骤啊，我做EB时怎么没几天就贴壁分化了呢，中间需不需要别的处理

scottist

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7 E3 V6 d+ {  p) _  U3 ahiPSC和miPSC步骤 不一样，不知道你养的是哪一种？

a279915845

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% |' s* W  [1 W' j8 V2 l* E我养的是大鼠iPS细胞，求详细步骤，谢谢

scottist

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. Y  \" {5 |: \) N1 @3 y( ZmiPSC直接加入到分化液中即可，用低吸附培养皿或培养板，密度最好不要太高；hiPSC最好在低吸附的培养皿或培养板中加ipsc培养液中继续培养12-24h，形成一些细胞团后，再移入分化液中培养，这样形成EB的数量更多一些。你养的没几天就贴壁分化了可能有两种原因：1，培养皿或培养板低吸附处理效果不好，我们用的corning的低吸附6孔板从未出现EB贴壁的情况；2，EB密度过大，出现粘连，最后形成一大团，下沉贴壁，这样的话减少一些密度，或者经常摇动。

zm19900508

选低吸附的培养皿或培养板，我们用分子克隆实验使用的平板，挺好

a279915845

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" P+ I5 n' S  Z
非常感谢你的帮助，我使用的是普通的低粘附的6孔板，如果是6孔板一般您按什么密度铺啊，中间换不换液啊，怎么换液啊，离心？分化液就是去除LIF的ES营养液吧？

scottist

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  u- O, a1 T  A
miPSC的话，6孔板每孔加2X10的5次方，换液有人采用半数换液，这样貌似损失很多，可以用离心换液，最好不要用枪头，用移液管，轻吸轻吹。分化液我们以前用加15%FBS的DMEM，只去掉LIF，还加KSR的话，分化效果可能不如加FBS效果好。

scottist

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4 s; }' Z7 b" d" _8 O4 i) j' NmiPSC的话，6孔板每孔加2X10的5次方，换液有人采用半数换液，这样貌似损失很多，可以用离心换液，最好不要用枪头，用移液管，轻吸轻吹。分化液我们以前用加15%FBS的DMEM，只去掉LIF，还加KSR的话，分化效果可能不如加FBS效果好。

scottist

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miPSC的话，6孔板每孔加2X10的5次方，换液有人采用半数换液，这样貌似损失很多，可以用离心换液，最好不要用枪头，用移液管，轻吸轻吹。分化液我们以前用加15%FBS的DMEM，只去掉LIF，还加KSR的话，分化效果可能不如加FBS效果好。大鼠iPS我没养过，EB培养步骤就不敢妄言了。

a279915845

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8 b. R- K  O; G0 j1 n* Z. e6 g/ e. ?5 a4 _
非常感谢您