新手上路，6周龄大鼠MSC P1 第5天

倒腾细胞

望各大神点评，已安排好下周一用3周龄重新取材

yiyi8909

三周可能有点小，要用成年大鼠，p1是传过一次吗？要是传过一次可能传代密度太小。要是原代的话应该是贴壁的少，中间操作有问题

倒腾细胞

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/ A4 l' M% V: H# K传过一次 是的 细胞太少了 之前消化的时候很多都没消下来 前辈你们一般用几周的大鼠取材？

素心无痕

动物年龄稍微小一些MSC的活性好一些。我们这边一般用4周左右的大鼠，另外，如楼上所述，传代接种密度太小了，不利于细胞生长，根据不同的培养耗材接种不同密度的细胞，这在人卫版《组织和细胞培养技术》中有介绍。消化细胞可以考虑使用sigma公司的trypsin（含0.25%EDTA）。

青云之上

密度太小了，应该是操作有问题，原代就很少？过细胞筛吗？~~~

倒腾细胞

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/ H$ v7 @* i, Q$ i. a  n
没有过细胞筛

倒腾细胞

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; c( `& E, v6 Q5 {+ L) l  ?2 v8 Q6 L9 M# a% Z
前辈 细胞密度的把握很重要 你们做原代的时候就会计数吗

yiyi8909

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% q  V8 Y; p! @$ `' L- u; a. q2 r5 C8 z4 m/ i+ g: d. J" \
消化一般加过胰酶20-30s后倒掉，剩余的消化一分钟到两分钟已经足够了，细胞都可以被消化下来，再吹打几次基本都成单个了。你用的培养基是哪种？我们一般用5周左右大鼠

倒腾细胞

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Gibico低糖DMEM培养基、Gibico FBS 10%，双抗1%
6 M* i& [9 k6 _: _我怎么觉得我们从取材到培养到换液到消化都有问题

青云之上

回复 倒腾细胞 的帖子- ^6 f5 ?) ^# T4 o

% ^" t1 q; [0 V+ \0 o原代一般是不计数的，原代时候细胞比较杂也会比较多，培养几天，一传代，因为培养基的关系，细胞就会比较纯了~~~