求助-小鼠颗粒细胞传代

moluxingke

最近做小鼠颗粒细胞的体外培养，常规刺破有腔卵泡取coc，消化后培养颗粒细胞，很多方法都是提到透明质酸酶或是反复吹打使颗粒细胞和卵母细胞分开，想请教一下，如果说培养的时候不移去卵母细胞，而是将卵母细胞和颗粒细胞共培养，会对培养的颗粒细胞有什么影响？  培养的原代颗粒细胞可以传代几次？有做的人分享一下经验呗。

aulenuyah

卵母细胞与颗粒细胞共培养的话卵母细胞应该会成熟，颗粒细胞应该会凋亡；
! B/ @# k. c' Y4 F# \我之前做过山羊的颗粒细胞，前后一共传了八代左右吧，不过颗粒细胞体外培养比较麻烦，要注意条件

墨如

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moluxingke

回复 aulenuyah 的帖子4 O4 y& |& W, I$ k  Q; L+ G
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嗯，谢谢了，我做小鼠的颗粒细胞原代培养，想得到的细胞更多一些，就试着把已经长好的细胞给传了代，用胰酶消化的，结果悲剧了……传代都快十个小时了，细胞还在培养基中游泳……

aulenuyah

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! k9 |9 B( L, ]' Q% P( t) Z7 k5 t- Q按理说颗粒细胞是可以穿戴的呀

moluxingke

回复 aulenuyah 的帖子  Y5 _7 I2 Z- L1 N
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嗯，可能是我处理过程出现问题了，也许是胰酶消化时间长了。说到这个问题，我想问一下，你收集山羊颗粒细胞的时候，是用什么方法将山羊颗粒细胞分散开的？小鼠的COC颗粒细胞之间连接的好像比较紧密，不像排卵后那样，用枪一吹就散开了，这个时候用枪吹打很费劲的，用透明质酸酶消化吧，又担心对颗粒细胞生长贴壁有影响。

aulenuyah

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首先将获得的颗粒细胞加入D-Hanks混匀离心，之后加入培养液吹散就可以了，我没有使用酶来消化，原代培养的时候最好不要用酶消化，透明质酸酶确实可以把细胞分散，但是透明质酸酶消化后的颗粒细胞贴壁特别差；另外，建议适当加一点点激素（比如FSH），这样细胞长得会好一些。

moluxingke

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多谢。再多问一句，刺破卵泡释放出COC的过程中，其实也伴有许多颗粒细胞释放出来的过程，当拣出COC的时候，其实剩下的除了残破的卵巢碎片外，还有很多散落的颗粒细胞，那么这些散落的颗粒细胞能否收集？一些大的卵巢碎片能否通过过滤除去？毕竟只收集COC上的颗粒细胞数量有点少了。

aulenuyah

回复 moluxingke 的帖子! L& H0 m6 D0 {$ Z7 J* o

1 l9 J( L) I* i# L这就要看你到底要收集什么细胞了，如果只需要颗粒细胞，而且不分到底是卵丘颗粒细胞还是壁层颗粒细胞的话，是可以收集的。7 Q, d6 d# c2 u* t1 `  R
如果你有体视显微镜的话，可以直接在显微镜下把大块的碎片捡出去扔掉，剩下的基本上就是颗粒细胞了。

moluxingke

回复 aulenuyah 的帖子! v0 r# b8 w& n
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这样也可以？剩下的小碎片里面不会有其他细胞污染吗？比如卵巢表皮细胞或是膜细胞等？主要就是担心这个。