流式检测，先固定细胞一段时间（几天），再加荧光抗体对结果有影响吗

rocfield

应该是不行的，流式一般是先抗体标记，再固定的。$ M, I/ {- I* ]9 y  [# N
先用甲醛固定会影响蛋白构形，改变抗原决定簇的三维构型，影响蛋白与抗体的结合，造成假阴性结果。

rocfield

回复 qing蓝qing 的帖子
# j! m* F4 m: _9 `# H# H2 P0 Y" W  p- v
不知道您的这个流程是从哪里查到的？- y& ]# I0 {$ ]2 K
我们做的大致是这样的：$ e5 Z$ U& c8 z6 A
1：收集的细胞用PBS洗一次；' w9 V, g8 D; `" O
2 重悬细胞后加荧光抗体，室温或4度孵育15～30分钟；$ O( |$ U3 e) ]8 l& {
3 PBS洗两次( C0 U( c1 q0 u& g
4 用4%多聚甲醛重悬细胞，4度保存直至上机检测（据说一周内检测都可以，我们只做过4度放了3天的，检测结果没受影响）  d- w3 H' @' d. ?, R3 `# h3 c
如果当天可以上机检测的话，不用多聚甲醛固定，直接用PBS重悬后上机检测就可以了。

rocfield

shaozi402 发表于 2014-6-13 21:38 1 N. d8 W7 @. L9 M
回复 rocfield 的帖子* H1 t8 E+ [7 N7 ^8 _" U

2 X: r& d2 t% [7 \& u' o# L检测表明抗原的也需要多聚甲醛固定吗？

4 K) g2 z3 B! d1 w7 D9 `* b4 \如果标记完当天可以上机检测的话，不用多聚甲醛固定效果更好。
1 F! S1 P0 f4 ~# Q如果标记完不能马上上机检测，必须要用多聚甲醛固定，上机之前4度保存。: W7 @+ R: g7 S# o, m. n& B

rocfield

回复 shaozi402 的帖子! }0 V, C/ M9 c* o8 @! I& p4 d; P

/ H4 T# a3 `7 _* p& P) m+ Z% D+ F+ F4%或1%的都行