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新手一枚,想请教 重编程过程中的一些问题,望高手解惑。
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1. 基质胶和明胶的问题; C; A' }& t4 U, n8 e% i
通过查找相关资料,了解到在诱导iPS过程中,预先铺胶,有两个方面的作用: A. 促进辐照或丝裂霉素处理后的MEF (不能增值)和 iPS的贴壁 和 促进iPS的增值;B. 通过胶包被培养皿,抑制iPS的分化,为什么这样就能抑制其分化呢???。 同时,查了下这两种胶的组分,其中Martrigel 是一种复杂的混合物,能用来上皮细胞的诱导分化,这不刚好与前面的内容矛盾吗,求解答。Gelatain 是一种两性物质,其作用和Martigel 又有什么区别呢,价格又如何呢?' d- ?$ C! j& A" G5 Z9 F* H
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2. 接触抑制问题2 a9 p$ F7 I' _. g8 p& q
在重编程过程中,出现接触抑制问题怎么办?如接种10W胎儿成纤维细胞至六孔板中,大概3-4d 细胞汇合度达到90%,而自己重编程的处理过程大于4d,如不进一步处理细胞则会出现接触抑制,此时是让其接触抑制,还是传代? 自己也查阅了一些病毒介导的方法,但里面由于诱导周期短,一般不涉及接触抑制这个问题。望高手解答。
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3. 关于Feeder Lif Vc等因素添加时间问题
! N8 V! R, V& l 看到不同的研究组使用不同的诱导策略,这些东西添加的时间也不尽相同,在什么时间段添加比较好呢,如有确定的结论,那可有相关的文献支持!* T' o$ L5 c# f" l5 \, J) f3 o" Q8 i
$ g2 A& [6 o9 V谢谢!!! |
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