请教 重编程过程中的一些问题

Blackangel

新手一枚，想请教 重编程过程中的一些问题，望高手解惑。0 n  b% N5 ~/ f" D7 q) j

* i* b+ b/ j0 o8 F7 o/ c7 |1. 基质胶和明胶的问题; T! U% x# u* l# y" m1 K/ X& U5 M
    通过查找相关资料，了解到在诱导iPS过程中，预先铺胶，有两个方面的作用: A. 促进辐照或丝裂霉素处理后的MEF （不能增值）和 iPS的贴壁 和 促进iPS的增值；B. 通过胶包被培养皿，抑制iPS的分化，为什么这样就能抑制其分化呢？？？。 同时，查了下这两种胶的组分，其中Martrigel 是一种复杂的混合物，能用来上皮细胞的诱导分化，这不刚好与前面的内容矛盾吗，求解答。Gelatain 是一种两性物质，其作用和Martigel 又有什么区别呢，价格又如何呢？
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2. 接触抑制问题
+ G/ P- Y/ u) `) x2 N% {     在重编程过程中，出现接触抑制问题怎么办？如接种10W胎儿成纤维细胞至六孔板中，大概3-4d 细胞汇合度达到90%，而自己重编程的处理过程大于4d，如不进一步处理细胞则会出现接触抑制，此时是让其接触抑制，还是传代？ 自己也查阅了一些病毒介导的方法，但里面由于诱导周期短，一般不涉及接触抑制这个问题。望高手解答。5 H. W+ }7 ]. ^; Y1 j

) }, e- O4 L% e' }5 D3. 关于Feeder Lif Vc等因素添加时间问题# g0 V8 I' V' l! F/ X0 s
     看到不同的研究组使用不同的诱导策略，这些东西添加的时间也不尽相同，在什么时间段添加比较好呢，如有确定的结论，那可有相关的文献支持！
. a. n0 Z+ K- M% t: f! w8 [& @( o4 S2 k) u# Q1 O
谢谢！！！

Blackangel

:(:(:(

Blackangel

好像要沉了！！！

Blackangel

再顶一下！！！

Andyhigh

顶一下！！！7 l1 }9 C. l% w9 g, ^

tainlangxing

可否请教下~重编程是是编得什么程？
! t2 Y6 f( _3 O7 @' Q  O

suning5

参与讨论一下，是否这两种材料特性是疏水的还是亲水性。普通培养板利于细胞贴壁，而这种胶的存在可以防止细胞贴壁分化，利于增殖？

bin

回复 Blackangel 的帖子
; g. R' T$ k& k6 L3 g8 s- H: b/ `2 X# s! Q8 ^. J$ ^
对于重编程我不是太了解，但是基于你的这几个问题我谈谈我的看法。第一个问题，基质胶也称细胞外基质（ECM），市场上买的一般是去细胞后的基准做成水溶性的，具有非常强想粘性，其中也含有大量的基质蛋白，可能有助于细胞分化。而明胶仅仅是作为一种粘附物质使用的，和胶原，多聚赖氨酸的作用差不多。滋养层细胞通过丝裂霉素C处理后可能会容易掉下来，铺了胶以后的粘附性增加，就不容易掉下来了。
/ d9 e* K2 _3 Y. x/ @第二个问题，关于iPS接触性抑制我还真的不知道，你可以多看看相关文献应该可以找到答案。" D/ Y  E( O" p
第三个问题，我还是建议按照你们课题组即成的方案走下来，细胞实验文献资料固然重要，但是经验可能更重要，很多细节方面文献里是不会写出来的，这个就需要请教师兄师姐了。

Damon-Salvatore

顶一下

a279915845

基于你的这几个问题我谈谈我的看法,可能不一定正确，希望一起交流探讨指正，问题一：在培养瓶里涂胶可能是为了让MEF细胞更好的贴壁，iPS细胞大部分是生长在MEF细胞上的，不会和瓶底大量接触，不会导致分化，而且在培养液里面是有添加LIF的，可以防止它分化。问题二：可以分开做，先诱导细胞，后将诱导的细胞挑取在MEF上进行培养，问题三：添加小分子可以在形态发生改变后一两天添加，可以查找一些相关的文献，也可以不添加。:P