请教 重编程过程中的一些问题

Blackangel

新手一枚，想请教 重编程过程中的一些问题，望高手解惑。
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1. 基质胶和明胶的问题
) n. w+ F* R; @4 r, P4 [# s, U0 A5 V    通过查找相关资料，了解到在诱导iPS过程中，预先铺胶，有两个方面的作用: A. 促进辐照或丝裂霉素处理后的MEF （不能增值）和 iPS的贴壁 和 促进iPS的增值；B. 通过胶包被培养皿，抑制iPS的分化，为什么这样就能抑制其分化呢？？？。 同时，查了下这两种胶的组分，其中Martrigel 是一种复杂的混合物，能用来上皮细胞的诱导分化，这不刚好与前面的内容矛盾吗，求解答。Gelatain 是一种两性物质，其作用和Martigel 又有什么区别呢，价格又如何呢？
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8 p! W2 H" M% X( Z" ]! t2. 接触抑制问题6 I* n& J: f/ X5 r3 d1 N
     在重编程过程中，出现接触抑制问题怎么办？如接种10W胎儿成纤维细胞至六孔板中，大概3-4d 细胞汇合度达到90%，而自己重编程的处理过程大于4d，如不进一步处理细胞则会出现接触抑制，此时是让其接触抑制，还是传代？ 自己也查阅了一些病毒介导的方法，但里面由于诱导周期短，一般不涉及接触抑制这个问题。望高手解答。
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3. 关于Feeder Lif Vc等因素添加时间问题! D* c3 q# s% I1 F1 t
     看到不同的研究组使用不同的诱导策略，这些东西添加的时间也不尽相同，在什么时间段添加比较好呢，如有确定的结论，那可有相关的文献支持！: v" m3 C4 f4 ?- u  K1 l& Q) r

( i0 ]2 ?9 i# J1 H8 \1 s谢谢！！！

a279915845

基于你的这几个问题我谈谈我的看法,可能不一定正确，希望一起交流探讨指正，问题一：在培养瓶里涂胶可能是为了让MEF细胞更好的贴壁，iPS细胞大部分是生长在MEF细胞上的，不会和瓶底大量接触，不会导致分化，而且在培养液里面是有添加LIF的，可以防止它分化。问题二：可以分开做，先诱导细胞，后将诱导的细胞挑取在MEF上进行培养，问题三：添加小分子可以在形态发生改变后一两天添加，可以查找一些相关的文献，也可以不添加。:P

Damon-Salvatore

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bin

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- }: y, C$ t6 P8 e  X# j7 T1 Y1 g9 @; S/ r4 p  {
对于重编程我不是太了解，但是基于你的这几个问题我谈谈我的看法。第一个问题，基质胶也称细胞外基质（ECM），市场上买的一般是去细胞后的基准做成水溶性的，具有非常强想粘性，其中也含有大量的基质蛋白，可能有助于细胞分化。而明胶仅仅是作为一种粘附物质使用的，和胶原，多聚赖氨酸的作用差不多。滋养层细胞通过丝裂霉素C处理后可能会容易掉下来，铺了胶以后的粘附性增加，就不容易掉下来了。
7 D$ R; N: ~" m) U, y第二个问题，关于iPS接触性抑制我还真的不知道，你可以多看看相关文献应该可以找到答案。
8 h7 A# d8 j5 _' R$ u  O7 Y第三个问题，我还是建议按照你们课题组即成的方案走下来，细胞实验文献资料固然重要，但是经验可能更重要，很多细节方面文献里是不会写出来的，这个就需要请教师兄师姐了。

suning5

参与讨论一下，是否这两种材料特性是疏水的还是亲水性。普通培养板利于细胞贴壁，而这种胶的存在可以防止细胞贴壁分化，利于增殖？

tainlangxing

可否请教下~重编程是是编得什么程？
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Andyhigh

顶一下！！！
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Blackangel

再顶一下！！！

Blackangel

好像要沉了！！！

Blackangel

:(:(:(