关于骨髓间充质干细胞分化心肌细胞的问题

ooocyqooo

之前没有太多的生物基础，一下子要做干细胞分化实验，有点头疼，细节的问题总搞不清楚，还请各位大神多多帮助，多谢大家！, _1 Y- C) v7 `9 T8 h
1.我要用5-氮胞苷分化，配置的5-氮胞苷要灭菌吗？能高温高压灭菌吗？
& H. K$ ^/ u2 C7 e2.一般要冻存骨髓间质干细胞的冻存液配比是多少呀？培养基：FBS：DMSO=4：5:1？or 7:2:1？
* h; U( ]. K5 y3 O* O# }: `. y3.要做免疫组化的话，选什么抗体比较好呀？哪个牌子的比较好用？
. N: f. c# b  i) y多谢大家啊。。。。。9 z' @( J8 {5 D& L- P( _/ O/ Y

chichao0000

1. 5-氮胞苷用0.2um过滤消毒；
" G. _0 _" [' f# x3 {3 d8 a8 u2. 我冻存的是脂肪干细胞  培养基：FBS：DMSO=7：2:1$ s* }, i( \7 ^% v* e8 @
3. 你是指心肌分化的marker吧，我没经验。

ooocyqooo

回复 chichao0000 的帖子7 }: t8 o7 B: K1 h9 \: A) @

- a% L. l4 U) m7 [多谢啦~~~

ooocyqooo

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4 i  h2 U) g" C( ~
  t! [5 S0 f8 u6 E1 Y: M; S那你用的培养基是什么呀？加了什么吗
7 {) A) o/ x) e: ]' ?* M- k

chichao0000

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1 I9 u$ Z" e0 ~8 D2 N! ]9 t
+ A% E& H& s" O8 Q  N; P9 n我用的是DMEM-Low Glucose+10%FBS。没有加其他生长因子，我看的文献就是完全培养基内加5-Az。但是胚胎干细胞进行心肌分化诱导的培养基就复杂了，我也没弄明白为什么，希望多讨论。

ooocyqooo

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  F8 w; S7 P4 t; l9 Y; S& |( |. S
我做的是间质干细胞，诱导剂是5-氮胞苷，但是胚胎干细胞就不是了；我现在用的培养基是加了FBS、双抗、谷氨酰胺。你在做什么呀。。。

chichao0000

回复 ooocyqooo 的帖子0 }2 x, g$ Z6 V0 k4 \, F/ f) c* q
( u5 M1 V1 k) ]" b# N8 ]
脂肪干细胞，你知道为什么胚胎干细胞向心肌分化培养基复杂的原因吗？

ooocyqooo

回复 chichao0000 的帖子. i% C9 D4 }. j3 J8 B. i: Q8 E- V
9 }. W* e+ w/ _% d0 q9 I
不是太清楚，因为当初就是觉得做胚胎干细胞太复杂，后来选做骨髓间质干细胞。是防止胚胎干细胞非定向分化吧，还要特定的微环境和滋养层，感觉看了文献就觉得好娇贵，难伺候