大家看过来---小鼠BM-MSC

yiwuya007

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分离的小鼠BM-MSC
; |$ z. S4 `0 X  t# v全骨髓法，hyclone的HG-DMEM+10% Hyclone 胎牛血清
+ c! q7 g8 u1 r- J) z) |传了两次了，但是长得特别慢，一次要10天左右才能传
% P9 J0 H8 t4 K6 h9 y照了几张照片，大家看看，有两个问题8 Z9 C' H( D* N% _, }% ^

1 `) v# n9 n' H( @: T+ N; v1. 为什么细胞分布呈几条平行的直线？（10x那张照片）
" B: r$ T( m- f8 H  w2. 为什么长得这么慢？培养基和胎牛血清不合适？1 M6 f- z1 d  P( P1 X
3.为什么有的细胞个体小而且单个分布，有的看似比较大而且长在一起？

wangshan

1.细胞分布呈现平行的直线是特殊现象还是普遍现象？看起来像是特殊区域这样，可能和培养皿有关，比如培养皿有划痕或者生产时coating的不好。2.我曾经分离过BM-MSC，P1代贴壁呈克隆生长时速度较慢，传代后正常速度生长，每三天传代。我使用的是corning LG-DMEM。我遇到的问题是传代到P5左右时细胞生长迟缓，基本不怎么生长。3.看似比较大的生长在一起的是细胞分裂的结果，新分离的BM-MSC贴壁之后是克隆形成阶段。比较小单个分布的细胞如果长不成克隆或慢慢死掉，或状态不好。

yiwuya007

回复 wangshan 的帖子7 n" y& O+ j" p  P& T
4 ^3 Y0 r' r0 }: m
1. 细胞分布呈线性的问题：我们传了两代，在每个皿中都看到了这种现象
& L% p7 f4 L3 h6 q+ n2. 我们分离后，传了两次，1：2 和1：1.5传，每次都非常慢8 g8 K; x  J8 ~8 _. P$ s0 Q
3.正像你所说的，单个分布的，好像不能形成克隆。是什么原因导致这些单个分布的不形成克隆呢？7 s0 e+ F5 q7 }' o

gzeb

先提高血清浓度试试，你是刚开始第一次做这类细胞培养吗？以前有没有出现类似情况。还有就是你这培养基多久了？是买500ml现成的还是自己配制的，加点谷氨酰胺试试。

倒腾细胞

您这个图片是处于哪个阶段的细胞？传代？第几天？原代细胞是个什么密度状态？提高浓度的话可以试试15%，1:1传代。培养基里的谷氨酰胺最多保持2周，之后需额外添加。单个细胞确定不是杂质细胞吗？传代前可用PBS冲洗下。MSC生长具有细胞密度依赖性，单个不能克隆可以是因为缺少细胞间的crosstalk吧（菜鸟，不是很懂）。这么规整的平行线条确实蛮像人为造成的，说不定是这个批次的培养瓶的问题。个人愚见，请前辈们多加指点

yiwuya007

回复 倒腾细胞 的帖子/ V: ]' }- O8 b7 D. u( |3 H
7 t' L  I$ S% {
刚刚传过两代的细胞，6/16刚刚分离的，原代细胞长了3-4天就长满了，
. t2 W* f' i& a谷氨酰胺我没有额外加，可能是这个原因？

yiwuya007

回复 gzeb 的帖子7 K5 T9 h& p  ?( W' M) O6 ~1 Y

) r! G# v. g/ V" a# m4 F" c. O也是最近才开始养这个细胞，前面分过一次，老化了。
4 L* S( _  x: h& W) E4 n6 _4 e前面一次也出现了分布呈线性
. b. N9 g' `8 ?5 M. B培养基是买的Hyclone的500mL的液体，用之前，上周刚刚加了FBS。
1 v8 ^5 P8 J/ j没有加谷氨酰胺

luyue6453

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9 O, Y, O# i$ e# Q7 p# v' i- [4 _1 f
$ A1 t, F! y, o0 [$ `- O7 `, o成线生长是因为你的底壁被移液管划痕了，细胞有边缘生长趋势，总这样，没关系，一开始长的慢，都要10天左右，等传两代就好了

yiwuya007

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, q; u# P8 A. W# x& j
/ Q5 \* q2 ]& t) u% W: C+ Y+ R你的意思是长得慢也是正常的？$ A& y! A0 m$ m/ T3 ^4 e
非常担心老化了，因为第一次分离的细胞就老化了

sysuhoo

基本同意二楼的意见，直线应该是人为造成，这个不需要深究。但楼主的细胞状态确实不好。个人认为有3个因素：1、细胞传代时细胞密度太低了，导致出现了大量的像布一样摊开的细胞形态；2、楼主过于急迫，小鼠的MSCs与其他的MSCs都不一样，具体请参见最新的一篇Cell Stem Cell综述，它有一个静息期；3、血清的浓度偏低，建议20%比较合适，特别是在早期阶段。