大鼠MSC的消化和计数

倒腾细胞

1、加3ml的胰酶在T75的瓶子里消化细胞，目测总感觉3ml的量少了点（虽然效果基本过得去 ），不知各位前辈有类似经验可以指导下吗？1 w# q) Y" S3 [+ M% {1 I8 Z
2、忘记计数这个步骤，原瓶传代后用枪头尖端残留的液体计了下数，为13乘以10的4次方。这个当然不能准确代表传代密度，小辈想请教下在正规操作时，细胞计数的价值性以及前辈们传代计数一般都是多少呢？

cyagen

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0 Q/ R% h! W% r# [- f8 O8 h! @0 C9 B$ ?
现在细胞状态怎么样？

倒腾细胞

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$ P4 Z; \! N8 n
$ W, Q9 {. D7 \3 ?) X今天取了个原代 大鼠MSC
6 f2 ^* [7 F& Y; C5 Y接种在2个T25中 细胞计数为是4.4×10^4/cm^2

cyagen

回复 倒腾细胞 的帖子9 Z0 p) a$ k. {. B$ ?

6 Y, |( @: B( }5 }6 L+ j按照2-4×10^4/cm^2的密度接种细胞，刚开始如果杂细胞比较多，消化时间不宜过长，可以视情况1：2或者1:3传代。

倒腾细胞

回复 cyagen 的帖子9 O* I. p, L2 O, E

/ B8 D2 @; _. M6 ?/ i0.25%的浓度。那请教下前辈，T25和T75的培养瓶接种密度为多少比较合适呢？

cyagen

你用得胰蛋白酶得浓度是多少呢？我们实验室一般T75的瓶子用1.5ml，不用太精准，覆盖瓶底就好，消化时间控制再2min以内，消化时间太长对细胞有损伤；计数主要是为了精确接种密度，合适的接种密度对细胞的生长也是至关重要的。

getingting

50ml 培养瓶我都是加2ml 0.05%的胰酶，不到两分钟就终止消化

wuzhongqi

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! C1 L0 b: o+ ~4 [8 x. t6 V# |' T! v3 A1 D0 D1 E* Q
可以，我们用时把酶37度孵温，1-2分钟就消化差不多了。

wuzhongqi

回复 倒腾细胞 的帖子* A7 N+ A$ Q, J& {

8 k5 O- [  f. R/ H, R消化瓶数少的可以用3ml，我们这有些多，操作时间长，酶多的话对细胞损伤大

屋檐上的乌鸦

回复 wuzhongqi 的帖子9 |! W: z6 N5 g% t, _
0 U# z6 K' ]; p( ?- J+ F
1ml酶加1ml生理盐水稀释，2ml可以覆盖T75的吧。。。2~3min可以消化完全