大鼠MSC的消化和计数

倒腾细胞

1、加3ml的胰酶在T75的瓶子里消化细胞，目测总感觉3ml的量少了点（虽然效果基本过得去 ），不知各位前辈有类似经验可以指导下吗？& \  ]8 D0 X$ \( e2 a
2、忘记计数这个步骤，原瓶传代后用枪头尖端残留的液体计了下数，为13乘以10的4次方。这个当然不能准确代表传代密度，小辈想请教下在正规操作时，细胞计数的价值性以及前辈们传代计数一般都是多少呢？

屋檐上的乌鸦

我一般用2ml左右，消化2min就可以都消化下来了

wuzhongqi

回复 屋檐上的乌鸦 的帖子
# Z1 o4 M1 r! y, m, U0 T/ O0 G2 w
/ {5 U( u8 _% |' x/ p: J! s" k( M1 f75的瓶我一般加1ml胰酶和1ml生理盐水

倒腾细胞

回复 wuzhongqi 的帖子
* |* ?* W4 E; L" H0 U! h: Y) t& G! e: H4 m/ N, \  m* H/ d
哦？还有生理盐水？这有什么讲究吗？

wuzhongqi

1:1加的   主要是稀释胰酶

倒腾细胞

回复 wuzhongqi 的帖子
$ U2 M2 t8 G* m/ \6 Z
2 `7 Z3 D  t5 i1 t6 K/ p) R前辈为什么要稀释胰酶呢？我们的酶和浓度就是按照文献来的~

wuzhongqi

我们用的是0.25%的EDTA     加1倍生理盐水稀释

屋檐上的乌鸦

wuzhongqi 发表于 2014-7-2 17:18 ! n; @3 r3 P9 e3 N! X- z' C4 v+ `
回复 屋檐上的乌鸦 的帖子
5 @* z+ r9 C" C( `$ g" }& k
! N& S  D5 z4 H) t- a) b75的瓶我一般加1ml胰酶和1ml生理盐水

7 B- b3 p' l# i5 q
你是稀释胰酶大的浓度的吧。

屋檐上的乌鸦

倒腾细胞 发表于 2014-7-3 20:30
7 m' t+ ?4 u2 K回复 wuzhongqi 的帖子: c2 ~5 b  W, R0 g
  O& C: S- \( S. C7 h
前辈为什么要稀释胰酶呢？我们的酶和浓度就是按照文献来的~

0 t2 k  T3 Z5 l- s, y2 N- r' B稀释完的效果和没稀释的效果差不多的！我也用过

wuzhongqi

回复 屋檐上的乌鸦 的帖子8 n4 V; K' Y; J  G0 ]) C4 W& @% w) Q

  r+ L, ]6 R  B& w# S一方面1ml酶在75的瓶中太少，不容易完全接触细胞，另一方面稀释过后避免没直接作用于细胞