大鼠MSC的消化和计数

倒腾细胞

回复 wuzhongqi 的帖子
* m8 h% i# @! g' a2 H) |, W# l
% S1 C# V$ T) P5 [- X: x+ n# S前辈，稀释之后胰酶浓度会不会太低呢？如果1ml太少那么为什么没有考虑像我们这样加3ml呢？是因为顾及到EDTA对细胞有损伤吗？

屋檐上的乌鸦

回复 wuzhongqi 的帖子
/ D9 X3 C8 f* l7 C2 r2 [
1 `0 p: W  F) X* {& S* U6 g1ml酶加1ml生理盐水稀释，2ml可以覆盖T75的吧。。。2~3min可以消化完全

wuzhongqi

回复 倒腾细胞 的帖子
' x+ o4 E' _+ z* K( a7 L  s# @1 g0 V: H" [% B
消化瓶数少的可以用3ml，我们这有些多，操作时间长，酶多的话对细胞损伤大

wuzhongqi

回复 屋檐上的乌鸦 的帖子
2 ]7 K# ?7 k4 b7 ~7 K7 j6 K" Q$ g2 |
0 S2 }* G( Q4 d3 w( o7 r# U可以，我们用时把酶37度孵温，1-2分钟就消化差不多了。

getingting

50ml 培养瓶我都是加2ml 0.05%的胰酶，不到两分钟就终止消化

cyagen

你用得胰蛋白酶得浓度是多少呢？我们实验室一般T75的瓶子用1.5ml，不用太精准，覆盖瓶底就好，消化时间控制再2min以内，消化时间太长对细胞有损伤；计数主要是为了精确接种密度，合适的接种密度对细胞的生长也是至关重要的。

倒腾细胞

回复 cyagen 的帖子& r. L. u" g9 s" v; j' L) q
) M$ v: w0 I# B
0.25%的浓度。那请教下前辈，T25和T75的培养瓶接种密度为多少比较合适呢？

cyagen

回复 倒腾细胞 的帖子( \3 U& X. q7 l$ y) e* h
5 c. ^$ e5 k/ K) h
按照2-4×10^4/cm^2的密度接种细胞，刚开始如果杂细胞比较多，消化时间不宜过长，可以视情况1：2或者1:3传代。

倒腾细胞

回复 cyagen 的帖子& c: ]$ B; G4 q/ t& W# m7 g7 T
2 |. F0 B4 Q5 w9 w4 ]
今天取了个原代 大鼠MSC
, N1 l; l" Z! W. M! ~- p接种在2个T25中 细胞计数为是4.4×10^4/cm^2

cyagen

回复 倒腾细胞 的帖子( {* Z: l$ }4 n1 U) Z; k0 C

" A0 A9 J6 H& s7 w# q6 q  i现在细胞状态怎么样？