大鼠MSC的消化和计数

倒腾细胞

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2 _& j# k0 K: o' C+ i# d  E前辈，稀释之后胰酶浓度会不会太低呢？如果1ml太少那么为什么没有考虑像我们这样加3ml呢？是因为顾及到EDTA对细胞有损伤吗？

屋檐上的乌鸦

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/ C1 O. \! ~' D7 R( G) C0 r
3 D. g% z& Z6 E$ o1ml酶加1ml生理盐水稀释，2ml可以覆盖T75的吧。。。2~3min可以消化完全

wuzhongqi

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1 u# G+ p( R1 G  K% i8 k% l# j& U2 w! ]  ]4 M- T- G$ N  }  E6 @
消化瓶数少的可以用3ml，我们这有些多，操作时间长，酶多的话对细胞损伤大

wuzhongqi

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/ E( t- B  g+ K6 {; X# ]0 }# ^! M5 X& `+ W- J
可以，我们用时把酶37度孵温，1-2分钟就消化差不多了。

getingting

50ml 培养瓶我都是加2ml 0.05%的胰酶，不到两分钟就终止消化

cyagen

你用得胰蛋白酶得浓度是多少呢？我们实验室一般T75的瓶子用1.5ml，不用太精准，覆盖瓶底就好，消化时间控制再2min以内，消化时间太长对细胞有损伤；计数主要是为了精确接种密度，合适的接种密度对细胞的生长也是至关重要的。

倒腾细胞

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* O2 C) C4 z0 i! J' _+ x+ L7 |5 y2 Y
0.25%的浓度。那请教下前辈，T25和T75的培养瓶接种密度为多少比较合适呢？

cyagen

回复 倒腾细胞 的帖子* s7 }1 |. F) `' M% C6 @

( ?5 f! v) ]8 O# b0 t# e按照2-4×10^4/cm^2的密度接种细胞，刚开始如果杂细胞比较多，消化时间不宜过长，可以视情况1：2或者1:3传代。

倒腾细胞

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5 S3 l  E7 R$ A3 o
0 [4 G+ n3 E) @' ]6 ]6 f4 }今天取了个原代 大鼠MSC4 [8 m2 D/ @, Q  \
接种在2个T25中 细胞计数为是4.4×10^4/cm^2

cyagen

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9 l# K' q& y. N+ m+ [/ p
% k8 w9 n4 o& h7 K- u  t现在细胞状态怎么样？