SD大鼠间充质干细胞消化计数

meizi

各位前辈，我养的SD大鼠干细胞传代时第三代到第四代计数下来的细胞反而比第二代到第三代计数的少，您们经验一瓶75cm2的长满大约有多少？

cyagen

细胞状态好的情况下，一个T75可获得的msc数量大概可以达到1*10^7cells

meizi

谢谢啊！这么多呀，前辈在培养的时候每次换液有没有水浴PBS和培养基？会不会与我传代时细胞密度低有关，我都是一传二，每瓶长满只有106数量级。

细胞海洋

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细胞海洋

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! d, e# K  P9 H  L. A7 I8 P# K看3楼

cyagen

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: C6 b+ F0 {% W  ^' ?' H需要的，细胞无论是换液还是传代，使用的培养基和PBS至少要复温到室温，你的细胞量那么少的话，有可能是细胞接种时过稀，现在细胞生长速度是不是比较慢，正常情况下我们是48-72h可以传代，长满一个T25的细胞量是100 0000，这样的细胞状态会比较好。

meizi

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# o5 |: ^! E6 ^
好的   谢谢

meizi

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$ b: W& v. E' i( x是很慢哦，第一代差不多耗了半个月，其余代都是八九天的样子。

cyagen

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0 A6 f: |$ C7 S& G+ a! }- ^8 T# z9 ?原代提取的细胞前面几代生长都比较慢的，不过你这个有点过慢了，推测杂细胞太多，有活力的细胞太少的原因吧；另外，培养体系也很关键

meizi

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就是杂细胞多，我用的是全骨髓贴壁法培养，前辈有没有好的方法能减少杂细胞呢？培养体系我用的是低糖培养液，GIBCO血清，起初15%，换几次液后用10%？前辈能给点建议吗？细胞质和量上不去，试验就没法进展啊,谢谢！