2i培养mESC遇到问题

scottist

最近在尝试用2i培养mESC，结果培养的克隆几乎没有长大，且随着时间推移（3天内），细胞飘起来的越来越多，贴壁的越来越少，不知到时什么原因？还请有经验的前辈指导一下。

scottist

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5 Y) ^2 {& K0 ?9 |" E非常感谢您的回复！还想请教您几个问题：如果飘起来比较多的话，是否每次换液时需将上清离心收集漂浮细胞？如果加少量的血清效果是否可以避免大量克隆漂浮？2i培养细胞周期一般要多久？也是每天都换液？我没加beta-巯基乙醇，不知道会不会对培养结果产生显著影响？能否用1-硫代甘油来代替？

scottist

回复 genedu 的帖子. A3 J# F9 Z0 y8 ]6 j; {/ t

  M" Q9 |4 k  L& `% k* j2 N* Q; H感谢您的指导，学生受益匪浅！

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8 y( g$ T# ^' k6 W回复 genedu 的帖子
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% ?8 g# ?) U8 d# [! f前辈您好，我最近培养效果依然不是很好，培养第一天，克隆生在还算正常，第三天的时候，贴壁的克隆几乎很少，而且克隆也未见明显增大（见附图），请问除DMEM/F12和2i之外，是否还需要加一些B27等才能维持mESC的正常生长？不知您是否方便传一张2i培养mESC图片，学生作为阳性对照学习一下？谢谢您了！

scottist

回复 genedu 的帖子8 V! S/ r2 I: K6 l( |
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谢谢前辈的指导！估计和我没有加N2B27有关，干细胞快速分裂需要一些营养成分，如果只有DMEMF12的话，不能够完全提供，所以干细胞基本不生长，时间长了就出现了大量的凋亡。再次感谢您的帮助！

scottist

回复 wbj1983 的帖子
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. t7 ?" B' p  B& }明白了，谢谢！

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回复 sylar 的帖子
3 V3 X5 S! p" i( w6 R' F3 i; ~) q" C/ Y( S
我看论坛上讨论2i的时候很多没说要加血清什么的，尽管文献中说要加N2B27，也没见大家提起，以为不加也可以，谁知道细胞就是养不起来，唉。缺乏常识啊。

scottist

回复 genedu 的帖子
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$ ?. B" ?5 D! {3 x) e. }; G* o绝对是颠簸不破的至理名言啊。