求分离脐带间充质干细胞酶消化法步骤。非常感谢！！！！

2013sp

求分离脐带间充质干细胞酶消化法步骤。非常感谢！！！！

洛古16

组织：0.2%一型胶原酶=2：1  
- ~; _, r: d9 x5 Q37℃消化半小时
6 h9 u; e. J  l& {加PBS稀释终止反应，
, _, w2 A: T1 f% K2 y离心，
0 i# i+ I# N2 ~. I- I/ b7 q培养基重悬

luoye1986

0.1%的胶原酶也可

水念人倦

1 W3 s* e& H( b; n, x4 a' q7 V. K7 X& D, m8 J
见文章第二页Reaserch Design and Methods部分，比较详细。
4 C* q* W( I5 w- l! E3 z

chenchunlei

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3 g* c4 u) l0 m7 T9 m2 P: U/ |/ k
步骤如下：
: q3 w) _2 v' U3 L2 C) @; I( s7 G% L: P1、将脐带机械性剪碎6 h7 T. P& E0 l" `9 M
2、加入胰酶37℃消化30min左右
7 \) g) O2 p) H( O, u2 l' D3、PBS洗两遍
4 N1 ?$ f+ ]0 v& p- A& C" e0 k4、机械性吹打) B8 h0 J) ^$ i2 u* b0 T
5、100目细胞筛过筛8 `( ^7 |2 Y8 K7 Q2 R0 M% t
6、收集细胞悬液离心
: d5 k: M8 D: G. [7、弃上清，培养液重悬细胞接种到培养皿中

scarletkiki

为什么我用胰酶消化后， 细胞悬液有点粘稠，镜下可以看到发亮的圆形细胞？

baby00000003

精细一点的话，可以先通过手术方法剥掉血管和羊膜
. ~! o1 g/ E6 M6 _1 Y  b7 [酶消化的时候加入透明质酸酶和分散酶比单用胶原酶更好~5 P0 Z. R6 l  U' t, m) N
罗氏好像有专门干这个用的混合酶，不图便宜的话，可以试试~

细胞海洋

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3 o" c; b) D: b
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lyj-0017

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/ c8 L4 w4 S* L5 E( {" S
- h$ R1 g8 t; b9 _( C为什么是组织多，消化酶量少？不是应该消化酶的量应该多于目标组织吗？