求分离脐带间充质干细胞酶消化法步骤。非常感谢！！！！

2013sp

求分离脐带间充质干细胞酶消化法步骤。非常感谢！！！！

洛古16

组织：0.2%一型胶原酶=2：1  
" L/ m% |+ Q9 w37℃消化半小时
7 W) G& y9 p) P/ a加PBS稀释终止反应，
2 q9 l2 @2 \' b4 F2 ~离心，' s; n8 o2 v) ]
培养基重悬

luoye1986

0.1%的胶原酶也可

水念人倦

3 ?5 U4 O- s1 O5 a

* j4 Z$ W! R6 N' N见文章第二页Reaserch Design and Methods部分，比较详细。" `3 m( r/ R1 f

chenchunlei

回复 2013sp 的帖子3 }# C' |9 R3 B6 d) W6 T/ u1 _, {
& L; h- D5 A7 H; ~' U& q2 s" {
步骤如下：) ^5 ?% l$ U9 T3 p, Q; [
1、将脐带机械性剪碎
) }" K0 ^3 L6 M) @2、加入胰酶37℃消化30min左右
/ _  y7 e, r# b) O  `* L/ {3、PBS洗两遍
$ H/ \- i. ^( K' j9 ?+ Y( r2 K4、机械性吹打0 ?% }, T8 X1 u6 l! p1 G! ?, x1 L
5、100目细胞筛过筛
+ ^  T* |! L. t7 p5 R; _$ j+ \6、收集细胞悬液离心7 K+ l5 L. u! C4 v: L6 s
7、弃上清，培养液重悬细胞接种到培养皿中

scarletkiki

为什么我用胰酶消化后， 细胞悬液有点粘稠，镜下可以看到发亮的圆形细胞？

baby00000003

精细一点的话，可以先通过手术方法剥掉血管和羊膜
9 P- d/ M+ O) C4 ?酶消化的时候加入透明质酸酶和分散酶比单用胶原酶更好~4 Y7 _- @4 _7 j$ N& @! a
罗氏好像有专门干这个用的混合酶，不图便宜的话，可以试试~

细胞海洋

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- h9 H* t+ }/ [+ p$ v9 t# {! h6 @# Z1 m* K5 E& s' G
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lyj-0017

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+ b& y" B# m4 I" f( u' V
# C( }' Z$ q5 m( ?* H为什么是组织多，消化酶量少？不是应该消化酶的量应该多于目标组织吗？