各位老师，求人脐带间充质干细胞

yinff1988

    小女子取人脐带间充质干细胞原代已经有两个月了，取了多次，只有第一次从组织块里爬出细胞，但是细胞状态不好，经过两次传代，细胞就不贴壁了。在剩下的时间里，不管怎样，没有一块组织块有细胞爬出（这让我非常奇怪）。我将取来的脐带放在50ml离心管内，里面盛35mlDMEM/LG,放到碎冰中，拿回实验室（实验室里医院只有50米）。实验中用含有1%双抗的PBS冲洗脐带中的淤血，剖除脐带中的三条血管，然后皿中加入约1.5ml培养液（DMEM/LG+10%FBS+1%双抗）将脐带剪碎，铺皿。第二天再向皿中各加入3-4ml培养液。实验全程都在冰袋上进行，时间约为1.5小时。我就是不明白为什么就是没有细胞，哪怕有一块组织块有细胞爬出。
, N* U8 S1 D( X$ {. z% N& B' E    时间紧迫，细胞还是没有眉目，实验无法进行，再此有哪位大神有多余细胞能借我或与我交换，让我的实验能初步进行，顺利毕业！当然，帮指出我的错误之处，同样不胜感激！先谢谢各位啦~

yinff1988

只好自己顶了

荷荷

试试直接加培养液0 b) _. w8 E2 M% Q  s$ w

yinff1988

回复 荷荷 的帖子3 p& W2 v* c7 X( R" \
* M/ u, d3 [) p. l  D" t! h( C
之前我就是直接加培养液，这是刚改的方法，但是都不行

荷荷

回复 yinff1988 的帖子
/ \) f5 r1 E& D5 x0 \/ I/ k5 f+ U. Q' Z2 r7 e" _! b- V/ ~
我一直这么操作的，有时候脐带还在4度过夜，原代分离过程也一直常温，细胞爬的很正常。你的手术器械没问题吧？

yinff1988

回复 荷荷 的帖子
1 H- \0 X& P% s8 X6 p, O. S# b0 [) S7 g8 `* d' S
每次用完我都清水刷干净，然后高温高压，这样做可以吗

水念人倦

我看你的描述，你去掉三根血管后就直接剪碎了？这样会存在很多杂细胞的，会有竞争抑制。你第一次成功爬出的时候有镜下的照片么，确定是MSC么，有么有多角形的杂细胞干扰？

fuyinsheng

首先MSC在脐带的华通氏胶中，我看你好像没有剥离华通氏胶这个步骤，而是直接剪碎的，好像也不用全程在冰上进行，室温操作也没问题。另外你说已经爬出细胞的传代后不贴壁可能是胰酶浓度过大或消化时间太长了，MSC还是比较好消化的。

倒腾细胞

师兄就是搞不定脐带的，果断转向养大鼠的

colins

你用的培养皿是一次性的吗？好像有些耗材反复使用就不适合细胞往外爬了，你有没有再用些新的培养皿啊？现在关于脐带间充质培养的文献有很多，如果你是照着做的话，应该没问题，建议你换换新的培养皿或培养瓶吧